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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司


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即用型高保真 PCR 試劑盒1.5mL實(shí)驗(yàn)步驟

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

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更新時(shí)間:2017-01-19 14:38:43瀏覽次數(shù):568次

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

即用型高保真 PCR 試劑盒1.5mL實(shí)驗(yàn)步驟運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細(xì)介紹

即用型高保真 PCR 試劑盒1.5mL實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品介紹:

即用型高保真 PCR 試劑盒1.5mL實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶,內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)R坏?RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標(biāo)記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段(如果使用隨機(jī)引物,將出現(xiàn)多個(gè)小片段)。

pH變色域:7.2(黃)~8.8(紅);1.8(橙)~2.0(黃)
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:褐色或紅棕色結(jié)晶粉末,溶于水,微溶于乙酸、乙醇。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。
〖保存〗:RT,保質(zhì)期5年
石蕊
〖英文名稱〗:Litmus;Tournesol;Turnsole;Laccamusica
〖其他名稱〗:石蕊指示劑
〖CAS號(hào)〗:1393-92-6
相對(duì)分子質(zhì)量:~3300
〖級(jí)別〗:IND
分光光度試驗(yàn):合格
PH :4.5(紅)~8.3(藍(lán))
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:藍(lán)色粉末或塊狀。主要成分為石蕊素(AzoliTmus)和紅石蕊精(EryThro-liTmin)的堿金屬化合物。部分溶于水和乙醇而呈藍(lán)色。加酸則溶液變紅,加過量堿則溶液又變藍(lán)。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)酸堿指示劑。制備石蕊試紙。培養(yǎng)基染色

一站式 Western 印跡套裝 (HRP 顯色法 )    柱式石蠟包埋組織 DNAout
一站式 Western 印跡套裝 (AP 顯色法 )    痰液采集器
核酸清除劑    百萬堿基植物 DNAout 
微量蛋白沉淀試劑盒    Southern 植物 DNAout 
植物總蛋白質(zhì)微量提取試劑盒 (SDS-PAGE)    木材 DNAout
植物總蛋白質(zhì)微量提取試劑 (2DE)     百萬堿基真菌 DNAout
植物總蛋白質(zhì)微量提取試劑 (2DE)     Southern 真菌 DNAout
柱式昆蟲 RNAout    柱式植物 mtDNAout,測(cè)序
HB101 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞    柱式血液 mtDNAout,測(cè)序
DNA 上樣液 (


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