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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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所 在 地上海市
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更新時(shí)間：2017-01-19 14:38:43瀏覽次數(shù)：568次
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即用型高保真 PCR 試劑盒1.5mL實(shí)驗(yàn)步驟運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。
即用型高保真 PCR 試劑盒1.5mL實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品介紹：
即用型高保真 PCR 試劑盒1.5mL實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提 供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
合成建文庫用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。
pH變色域：7.2（黃）～8.8（紅）；1.8（橙）～2.0（黃）
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：褐色或紅棕色結(jié)晶粉末,溶于水,微溶于乙酸、乙醇。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。
〖保存〗：RT，保質(zhì)期5年
石蕊
〖英文名稱〗：Litmus；Tournesol；Turnsole；Laccamusica
〖其他名稱〗：石蕊指示劑
〖CAS號(hào)〗：1393-92-6
相對(duì)分子質(zhì)量：～3300
〖級(jí)別〗：IND
分光光度試驗(yàn)：合格
PH ：4.5(紅)～8.3(藍(lán))
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：藍(lán)色粉末或塊狀。主要成分為石蕊素(AzoliTmus)和紅石蕊精(EryThro-liTmin)的堿金屬化合物。部分溶于水和乙醇而呈藍(lán)色。加酸則溶液變紅，加過量堿則溶液又變藍(lán)。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)酸堿指示劑。制備石蕊試紙。培養(yǎng)基染色
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