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核苷酸類似物法易錯 PCR 試劑盒15 次原理

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更新時間:2017-01-19 14:36:36瀏覽次數:517次

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產品簡介

核苷酸類似物法易錯 PCR 試劑盒15 次原理運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

核苷酸類似物法易錯 PCR 試劑盒15 次原理產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
核苷酸類似物法易錯 PCR 試劑盒15 次原理產品介紹:

合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

純度:≥99.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:類白色至黃色粉末。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)化學發光試劑
〖保存〗:-20℃。保質期2年
1-亞硝基-2-萘酚
〖英文名稱〗:1-Nitroso-2-naphthol;α-Nitroso-β-nophthol
〖其他名稱〗:α-亞硝基-β-萘酚;鈷試劑;1-亞硝基萘酚;1,2-萘醌-1-肟
〖CAS號〗:131-91-9
C10H7NO2=173.17
〖級別〗:AR
純度:≥96.0%
〖熔點〗:104~108℃
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:棕黃色針狀結晶或粉末。易升華。微溶于水,溶于乙醇、苯、乙迷、二硫化碳、苛性堿溶液,化碳、四錄化碳等有機溶劑,微溶于冷石油醚。溶液微黃色或棕橙色,與Co3+、Ru3+、ZrO2+、Fe2+等生成紅或藍色得微溶于水的配合物,可為甲烷、四錄化碳萃取
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)用作光度法測定鈷、鈀、鋯的顯色劑。用作富集Cr3+、Co2+、Fe2+、UO 的共沉淀劑,也用作Ag+、Cd2+、Co2+、Cu2+、Ni2+、Th4+等離子的萃取劑,稱量法測定鈷的沉淀劑。
〖保存〗:RT
1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚
〖英文名稱〗:PAN;1-(2-Pyridylazo)-2-naphthol
〖其他名稱〗:α-吡啶偶氮-β-萘酚;過氧硝酸己鹽酯;2-吡啶偶氮-2-萘酚;1-(2-聯氮吡啶)-2-萘酚
〖CAS號〗:85-85-8

雜交袋    DNA 上樣液 ( 藍 ),6×( 非甘油 )
JM109 化學感受態細胞    超螺旋 DNA 分子量標準
SURE 化學感受態細胞    PAGE 膠長加樣槍頭
低載量 PCR 片段純化試劑盒    水飽和正丁醇
低載量 PCR 片段純化試劑盒    預混型丙烯酰胺 - 甲叉雙丙烯干粉 (19:1)
高載量 PCR 片段純化試劑盒    預混型丙烯酰胺 - 甲叉雙丙烯干粉 (29:1)
高載量 PCR 片段純化試劑盒    冷凍型血液 RNA 保存液
RNA  Oligo(dT) 纖維素    柱式 G+細菌 RNAout
MgCl2溶液,25mM,PCR     柱式病毒 RNA-DNA 雙提試劑盒
硅膠膜 DNA 離心吸附柱 ( 大提 )    凝膠法 miRNA 分離試劑盒 
*消化液 ( 含 EDTA)    一站式磁珠法植物 mRNAout
*消化液 ( 無 EDTA)    一站式磁珠法全血 mRNA 提取試劑盒
青*溶液    一站式磁珠法真菌 mRNA 提取試劑盒
 HEPES( 羥乙基乙硫磺酸 )


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