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上海邦景實業(yè)有限公司
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所 在 地上海市
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更新時間:2017-01-19 14:35:39瀏覽次數(shù):483次
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DNA Shuffling 試劑盒10 次實驗方法運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。
DNA Shuffling 試劑盒10 次實驗方法合成建文庫用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)R坏?RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
DNA Shuffling 試劑盒10 次實驗方法按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現(xiàn)多個小片段)。
產(chǎn)品介紹:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
C15H11N3O=249.27
〖級別〗:AR
分光有效〖含量〗:≥90.0%
〖熔點〗:138~142℃(2℃)
銅絡合物摩爾吸收系數(shù),ε/(L/cm·mol):≥2.1×104
〖灼燒殘渣〗(以〖硫酸鹽〗計):≤0.1%
乙醇溶解試驗:合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:橙紅色無定形粉末。溶于甲醇、乙醇、苯、乙迷、氯方和熱稀堿液,不溶于水。溶液在pH12以上時,呈粉紅色,在弱酸中呈橙紅色,在濃硫酸中呈紫色。其金屬絡合物呈粉紅色或紅色。zui大吸收波長 462nm。有刺激性
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)絡合指示劑,滴定鉍、鎘、銅、鎵、銦、鑭系元素、〖鎳〗、〖鉛〗、釷、駝(III)、鈾、〖鋅〗。痕量金屬的沉淀富集。光度測定鈷、銅、三價〖鐵〗、鎵、汞、銦、銥、錳、〖鎳〗、〖鉛〗、鈀、銠、釕、銻、鈦、鈾、釩、〖鋅〗、鋯和鑭系元素
〖保存〗:RT,避光
4-(2-吡啶偶氮)*
〖英文名稱〗:PAR;4-(2-Pyridylazo)resorcinol
〖其他名稱〗:吡啶-(2-偶氮-4)*;4-(2-吡啶偶氮)-1,3-苯二酚;4-2-吡啶偶氮*
〖CAS號〗:1141-59-9
C11H9N3O2=215.21
〖級別〗:AR
〖含量〗:≥95.0%
親和硅烷 Oligo(dT) 再生溶液
紅細胞裂解液 B 型 ( 流式細胞分析用 ) *標記的 Oligo(dT)
Tricine 干粉,電泳 柱式血清血漿 RNAout
TBE 電泳液 ,10× 柱式血清血漿 DNAout
TBE 電泳液 ,10× 氣相 RNase 清除劑
柱式尿液 DNAout DNase I 溶液
非凍型尿液 DNA 保存液 免 DNA 提取 PCR 試劑盒
非凍型尿液 DNA 保存液 即用型熱啟動 PCR 試劑盒
一站式 DNA 尿素 -PAGE 電泳套裝 接頭 DNA(BamH I(Bgl II)-Sma I)
柱式 DNA 清除劑 接頭 DNA(EcoR I-Sma I)
蛋白膠微量回收試劑盒 接頭 DNA(Hind Ⅲ -Sma I)
蛋白膠中量回收試劑盒 接頭 DNA(Sal I-Sma I)
柱式植物 RNAout 2.0 接頭 DNA(pSma I)
Ⅲ DNA
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