DNA Shuffling 試劑盒10 次實驗方法

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更新時間：2017-01-19 14:35:39瀏覽次數(shù)：483次

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產(chǎn)品簡介

DNA Shuffling 試劑盒10 次實驗方法運輸及保存低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細介紹

DNA Shuffling 試劑盒10 次實驗方法合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶（含 RI），反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
DNA Shuffling 試劑盒10 次實驗方法按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶（含 RI），反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機引物，將出現(xiàn)多個小片段）。

產(chǎn)品介紹：

產(chǎn)品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

C15H11N3O=249.27
〖級別〗：AR
分光有效〖含量〗：≥90.0%
〖熔點〗：138～142℃(2℃)
銅絡合物摩爾吸收系數(shù)，ε/(L/cm·mol)：≥2.1×104
〖灼燒殘渣〗(以〖硫酸鹽〗計)：≤0.1%
乙醇溶解試驗：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：橙紅色無定形粉末。溶于甲醇、乙醇、苯、乙迷、氯方和熱稀堿液，不溶于水。溶液在pH12以上時，呈粉紅色，在弱酸中呈橙紅色，在濃硫酸中呈紫色。其金屬絡合物呈粉紅色或紅色。zui大吸收波長 462nm。有刺激性
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)絡合指示劑，滴定鉍、鎘、銅、鎵、銦、鑭系元素、〖鎳〗、〖鉛〗、釷、駝(III)、鈾、〖鋅〗。痕量金屬的沉淀富集。光度測定鈷、銅、三價〖鐵〗、鎵、汞、銦、銥、錳、〖鎳〗、〖鉛〗、鈀、銠、釕、銻、鈦、鈾、釩、〖鋅〗、鋯和鑭系元素
〖保存〗：RT，避光
4-（2-吡啶偶氮）*
〖英文名稱〗：PAR；4-(2-Pyridylazo)resorcinol
〖其他名稱〗：吡啶-(2-偶氮-4)*；4-(2-吡啶偶氮)-1,3-苯二酚；4-2-吡啶偶氮*
〖CAS號〗：1141-59-9
C11H9N3O2=215.21
〖級別〗：AR
〖含量〗：≥95.0%

親和硅烷    Oligo(dT) 再生溶液
紅細胞裂解液 B 型 ( 流式細胞分析用 )    *標記的 Oligo(dT)
Tricine 干粉，電泳    柱式血清血漿 RNAout
TBE 電泳液 ,10×   柱式血清血漿 DNAout
TBE 電泳液 ,10×   氣相 RNase 清除劑
柱式尿液 DNAout   DNase I 溶液
非凍型尿液 DNA 保存液   免 DNA 提取 PCR 試劑盒
非凍型尿液 DNA 保存液   即用型熱啟動 PCR 試劑盒
一站式 DNA 尿素 -PAGE 電泳套裝   接頭 DNA(BamH I(Bgl II)-Sma I)
柱式 DNA 清除劑   接頭 DNA(EcoR I-Sma I)
蛋白膠微量回收試劑盒   接頭 DNA(Hind Ⅲ -Sma I)
蛋白膠中量回收試劑盒   接頭 DNA(Sal I-Sma I)
柱式植物 RNAout 2.0   接頭 DNA(pSma I)
Ⅲ   DNA