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即用型易錯 PCR 試劑盒100 次實驗步驟

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

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更新時間：2017-01-19 14:34:50瀏覽次數(shù)：601次

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產(chǎn)品簡介

即用型易錯 PCR 試劑盒100 次實驗步驟運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細介紹

即用型易錯 PCR 試劑盒100 次實驗步驟產(chǎn)品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提 供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標記等。

即用型易錯 PCR 試劑盒100 次實驗步驟合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機引物，將出現(xiàn)多個小片段）。

靈敏性試驗：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：棕色或橘紅色粉末，微溶于水，溶于醇和醚，易溶于酸性及堿性水溶液，其鈉鹽易溶于水。與金屬離子形成水溶性或不溶于水的配合物，配合物多為紅色或紅紫色?！既埸c〗188℃
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)絡(luò)合滴定指示劑，測定鉍、鎘、銅、鎵、汞、銦、錳、〖鎳〗、〖鉛〗、釷、駝(III)、〖鋅〗、鑭系元素離子等。光度測定鉍、鈷、銅、鎵、銦、鑭系元素、錳、鉬、鈮、〖鎳〗、镎、鋨、〖鉛〗、鈀、銠、釕、鈧、鉭、駝(III)、鈦、鈾和釩
〖保存〗：RT，避光
4-（2-吡啶偶氮）*鈉鹽
〖英文名稱〗：PAR sodium salt；4-(2-Pyridylazo)resorcinol monosodium salt
〖其他名稱〗：吡啶-(2-偶氮-4)*一鈉鹽；4-(2-吡啶偶氮)*單鈉鹽一水物
〖CAS號〗：16593-81-0
C11H8N3NaO2·H2O=255.21
〖級別〗：IND
純度：≥95.0%
Maximum UV absorption：411 nm
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：橙棕色至棕色結(jié)晶粉末。易溶于水和乙醇，水溶液呈黃色，不溶于乙迷。zui大吸收波長 411nm。有刺激性。

DNA  75% 乙醇    EcoR I-Not I-BamH I 接頭
lambda(λ)DNA    白細胞裂解液
lambda(λ)DNA    酵母 DNAout
lambda(λ)DNA    柱式酵母 DNAout
即用型熒光定量 PCR 試劑盒    玻璃珠法柱式酵母 DNAout
即用型熒光定量 PCR 試劑盒    96 孔板質(zhì)粒 DNAout( 真空法 )
Tth DNA 聚合酶    Cy3-dCTP 溶液，10mM
AMV 逆轉(zhuǎn)錄酶    Cy5-dCTP 溶液，10mM
電泳甘油    Sephadex G50 介質(zhì)
XL1-Blue 化學(xué)感受態(tài)細胞    DAB 法雜交試劑盒
BL21(DE3) 化學(xué)感受態(tài)細胞    TMB 法雜交試劑盒
 (3)φX174 DNA/Hae 


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