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即用型熱啟動 PCR 試劑盒1.5mL原理

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更新時間:2017-01-19 14:32:57瀏覽次數:288次

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產品簡介

即用型熱啟動 PCR 試劑盒1.5mL原理運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

即用型熱啟動 PCR 試劑盒1.5mL原理產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
即用型熱啟動 PCR 試劑盒1.5mL原理產品介紹:

合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

C27H31N2O7S2 · 0.5Ca=579.71
〖級別〗:AR
〖含量〗:≥85.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:暗紅青蓮色或深藍紫色粉末或顆粒。易溶于水呈藍色,微溶于乙醇呈藍綠色。遇濃硫酸顯棕橄欖黃色,稀釋顯深黃至綠色。水溶液加氫氧不變色,加熱則呈深紫色
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)酸堿指示劑,pH 0.8(黃)~3.0(藍)。氧化還原指示劑(黃綠色~橙色)。螺旋體和活體染色
〖保存〗:RT
硫酸奎寧二水物
〖英文名稱〗:Quinine hemisulfate salt dihydrate
〖其他名稱〗:(8S,9R)-6'-甲氧基金雞納-9-醇〖硫酸鹽〗二水物;奎寧〖硫酸鹽〗二水物;奎寧硫酸酯二水物;硫酸金雞納鹽二水物
〖CAS號〗:6119-70-6
C40H48N4O4·H2O4S·2H2O=782.96
〖級別〗:BR
〖含量〗:≥98%
〖干燥失重〗:≤5.0%
PH:5DNA 電泳分子量標準 (3)φX174 DNA/Hinc Ⅱ    無內毒素螢火蟲熒光素
隨機引物法 DNA 探針標記試劑盒    Sephacryl S-400 基質
隨機引物法 DNA 探針*標記試劑盒    鏈霉親和素
隨機引物法 DNA 探針標記試劑盒    鏈霉親和素,AP 標記
PCR 法 DNA 探針標記試劑盒    DNA  Triton
PCR 法 DNA 探針*標記試劑盒     DNA  Tween 20
PCR 法 DNA 探針標記試劑盒    *,測序
TdT 加尾法 DNA 標記試劑盒    彈性蛋白酶
TdT 加尾法 DNA *標記試劑盒    *
TdT 加尾法 DNA 標記試劑盒    嗜熱菌蛋白酶
柱式 BAC DNAout     *,質譜
    DTT,蛋白


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