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即用型 PCR 試劑盒 2.0 1 mL實(shí)驗(yàn)方法

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

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更新時(shí)間:2017-01-19 14:23:03瀏覽次數(shù):142次

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產(chǎn)品簡介

即用型 PCR 試劑盒 2.0 1 mL實(shí)驗(yàn)方法運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細(xì)介紹

即用型 PCR 試劑盒 2.0 1 mL實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶,內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
即用型 PCR 試劑盒 2.0 1 mL實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品介紹:
合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)R坏?RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標(biāo)記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段(如果使用隨機(jī)引物,將出現(xiàn)多個(gè)小片段)。

堿性藍(lán)26
〖英文名稱〗:Basic Blue 26;[4-[[4-Anili-naphthyl][4-(dimethylamino)phenyl]methylene]cyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]dimethylammonium chloride;Victoria Blue B;C.I. 44045
〖其他名稱〗:維多利亞藍(lán)B;堿性品藍(lán)B;堿性艷藍(lán)B;鹽基品藍(lán)B;維多利亞蘭B;品藍(lán)B;勝利藍(lán)B
〖CAS號(hào)〗:2580-56-5
C33H32ClN3=506.09
〖級(jí)別〗:BS
生物染色試驗(yàn):合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:青銅色發(fā)光顆粒或紫光粉末。溶于熱水呈藍(lán)色,溶于乙醇為純藍(lán)色,微溶于冷水。〖熔點(diǎn)〗 206℃(分解)。zui大吸收波長 599nm
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)生物染色劑,如神經(jīng)組織、膠質(zhì)、血液、螺旋體染色
〖保存〗:RT,避光。保質(zhì)期5年
2,4-二羥基-4’-硝基偶氮苯
〖英文名稱〗:Azoviolet;Magneson I;4-(4-Nitrophenylazo)resorcinol
〖其他名稱〗:對(duì)硝基苯偶氮*;鎂試劑I;偶氮紫;偶氧紫;(對(duì)硝基苯偶氮)*;4-(4-硝基苯偶氮)*
〖CAS號(hào)〗:74-39-5
C12H9N3O4=259.22

肌球蛋白    天凈沙 SPIA 擴(kuò)增試劑盒 ( 用于擴(kuò)增 DNA 模板 )
吖啶橙    親和素
石榴紅硫酸鹽    辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素
N,N- 雙 (2- 羥乙基 )-3- 氨基乙磺酸    堿性磷酸酶標(biāo)記親和素
乙酰輔酶 A    熒光素 (FITC) 標(biāo)記親和素
8- 環(huán)戊基 -1,3- 二丙基黃嘌呤    R- 藻紅蛋白標(biāo)記親和素
5- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚基磷酸鹽 (BCIP)    中性親和素蛋白
D- 阿拉伯糖    *
亮抑酶肽    熒光素標(biāo)記的*
2-( 環(huán)己胺基 ) 乙烷磺酸    *化的牛血清白蛋白
氨基 10B    *化的辣根過氧化物酶
乙二醛    *化的堿性磷酸酶 (AP)
    OPD 干粉


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