即用型 PCR 試劑盒 2.0 1 mL實(shí)驗(yàn)方法

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產(chǎn)品分類 品牌分類

  核酸擴(kuò)增產(chǎn)品

常用PCR引物

種屬鑒定PCR Mix

單細(xì)胞擴(kuò)增

其他擴(kuò)增試劑盒

LAMP擴(kuò)增

全基因組擴(kuò)增（WGA）

即用型RT-PCR

RT

即用型PCR

PCR成分及添加劑

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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司

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產(chǎn)品簡介

即用型 PCR 試劑盒 2.0 1 mL實(shí)驗(yàn)方法運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

即用型 PCR 試劑盒 2.0 1 mL實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
即用型 PCR 試劑盒 2.0 1 mL實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品介紹：
合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

堿性藍(lán)26
〖英文名稱〗：Basic Blue 26；[4-[[4-Anili-naphthyl][4-(dimethylamino)phenyl]methylene]cyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]dimethylammonium chloride；Victoria Blue B；C.I. 44045
〖其他名稱〗：維多利亞藍(lán)B；堿性品藍(lán)B；堿性艷藍(lán)B；鹽基品藍(lán)B；維多利亞蘭B；品藍(lán)B；勝利藍(lán)B
〖CAS號(hào)〗：2580-56-5
C33H32ClN3=506.09
〖級(jí)別〗：BS
生物染色試驗(yàn)：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：青銅色發(fā)光顆粒或紫光粉末。溶于熱水呈藍(lán)色，溶于乙醇為純藍(lán)色，微溶于冷水。〖熔點(diǎn)〗 206℃(分解)。zui大吸收波長 599nm
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)生物染色劑，如神經(jīng)組織、膠質(zhì)、血液、螺旋體染色
〖保存〗：RT，避光。保質(zhì)期5年
2,4-二羥基-4’-硝基偶氮苯
〖英文名稱〗：Azoviolet；Magneson I；4-(4-Nitrophenylazo)resorcinol
〖其他名稱〗：對(duì)硝基苯偶氮*；鎂試劑I；偶氮紫；偶氧紫；(對(duì)硝基苯偶氮)*；4-(4-硝基苯偶氮)*
〖CAS號(hào)〗：74-39-5
C12H9N3O4=259.22

肌球蛋白   天凈沙 SPIA 擴(kuò)增試劑盒 ( 用于擴(kuò)增 DNA 模板 )
吖啶橙   親和素
石榴紅硫酸鹽   辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素
N,N- 雙 (2- 羥乙基 )-3- 氨基乙磺酸   堿性磷酸酶標(biāo)記親和素
乙酰輔酶 A   熒光素 (FITC) 標(biāo)記親和素
8- 環(huán)戊基 -1,3- 二丙基黃嘌呤   R- 藻紅蛋白標(biāo)記親和素
5- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚基磷酸鹽 (BCIP)   中性親和素蛋白
D- 阿拉伯糖   *
亮抑酶肽   熒光素標(biāo)記的*
2-( 環(huán)己胺基 ) 乙烷磺酸   *化的牛血清白蛋白
氨基 10B   *化的辣根過氧化物酶
乙二醛   *化的堿性磷酸酶 (AP)
   OPD 干粉

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