DNA 修復混合液 150 次實驗步驟

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更新時間：2017-01-19 14:21:40瀏覽次數(shù)：470次

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  核酸擴增產(chǎn)品

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全基因組擴增（WGA）

即用型RT-PCR

RT

即用型PCR

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上海邦景實業(yè)有限公司

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產(chǎn)品簡介

DNA 修復混合液 150 次實驗步驟運輸及保存低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細介紹

DNA 修復混合液 150 次實驗步驟產(chǎn)品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標記等。
DNA 修復混合液 150 次實驗步驟產(chǎn)品介紹：
合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機引物，將出現(xiàn)多個小片段）。

〖級別〗：AR
靈敏度實驗：合格
zui大吸收波長：555～565nm
〖灼燒殘渣〗(以〖硫酸鹽〗計)：≤0.2%
氫氧溶液溶解試驗：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：紅棕色粉末。溶于稀堿溶液呈紅紫色，微溶于沸乙醇、丙同、乙酸和甲苯，均呈黃色，幾乎不溶于水。〖熔點〗199～200℃。有刺激性
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)鎂和鉬的測定。吸附指示劑
〖保存〗：RT，避光
4-[(2,4-二羥基苯基)偶氮]苯磺酸鈉
〖英文名稱〗：Tropaeolin O sodium salt；4-([2,4-Dihydroxyphenyl]azo)benzenesulfonic acid sodium salt；Acid Orange 6；Chrysoin；Resorcinol yellow
〖其他名稱〗：*磺；金蓮橙O；酸性橙6；金蓮橙；*品黃；偶氮*磺酸鈉；樹脂酚黃O
〖CAS號〗：547-57-9
C12H9N2O5SNa=316.27
〖級別〗：IND
〖含量〗：≥65.0%
紅外光譜〖鑒別〗：合格
PH變色域：11.1(黃)～12.7(橙)
水溶解試驗：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：紅褐色至棕色粉末。溶于水呈金黃色,溶于乙醇、丙同和溶纖劑,不溶于其他有機溶劑。水溶液加濃鹽酸無變化,加入濃氫氧呈橙棕色。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)生物染色
〖保存〗：RT
耐爾藍A
〖英文名稱〗：Nile Blue A；Basic Blue 12；Nile blue sulfate
〖其他名稱〗：5-氨基-9-(二乙基氨基)苯并[α]吩惡嗪-7-翁〖硫酸鹽〗；硫酸耐爾藍；硫酸尼羅藍；耐爾藍；耐爾蘭A；尼羅藍A；耐爾蘭；尼羅蘭A
〖CAS號〗：3625-57-8

牛磺酸   *化的 β- 半乳糖苷酶
甜菜堿   *化蛋白 G
遺傳霉素   *化蛋白 A
重蒸酚   *化蛋白 L
琥珀酸 ( 丁二酸 )   *化兔 IgG
馬來酸   *化山羊抗親和素
四甲基乙二胺   Western 封堵液
四甲基乙二胺   酪蛋白溶液 (TBS)
甲叉雙丙烯酰胺   酪蛋白溶液 (PBS)
刀豆球蛋白 A Ⅲ   ONPG 干粉
刀豆蛋白 A IV   Tris 緩沖鹽溶液 (TBS)
*   氯萘酚溶液，3mg/mL
腐胺   CN/DAB 底物套裝
牛胰島素   ABTS 溶液，7mM
羧肽酶 A( 牛胰 )