可逆型 Taq DNA 聚合酶抑制劑0.3mL實(shí)驗(yàn)步驟

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  核酸擴(kuò)增產(chǎn)品

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

可逆型 Taq DNA 聚合酶抑制劑0.3mL實(shí)驗(yàn)步驟運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

可逆型 Taq DNA 聚合酶抑制劑0.3mL實(shí)驗(yàn)步驟合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
可逆型 Taq DNA 聚合酶抑制劑0.3mL實(shí)驗(yàn)步驟按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

產(chǎn)品介紹：
產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

〖保存〗：RT
固紅B
〖英文名稱〗：Fast red B salt；1-Amino-2-methoxy-4-nitrobenzene diazotated 1,5-naphthalenedisulfonate salt；2-Methoxy-4-nitrobenzenediazonium 1,5-naphthalenedisulfonate salt
〖其他名稱〗：標(biāo)準(zhǔn)重氮色鹽玫瑰紅；B紅鹽；固紅B鹽
〖CAS號(hào)〗：49735-71-9
C7H6N3O3·C10H7O6S2=467.43
〖級(jí)別〗：BR
純度：≥90.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：鮮黃色粉末。商品常是穩(wěn)定的1,5-萘二磺酸鹽。有刺激性
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)組織化學(xué)中用于重氮化偶合反應(yīng),測(cè)定磷酸酶和脂酶
〖保存〗：RT，避光
5(6)-羧基二乙酸熒光素琥珀酰亞胺酯
〖英文名稱〗：CFSE；5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester
〖其他名稱〗：5(6)-羧基二醋酸乙酸熒光素琥珀酰亞胺酯；二乙酸-N-琥珀酰亞胺酯羰基熒光素
〖CAS號(hào)〗：150347-59-4
C29H19=557.46
〖級(jí)別〗：BR
〖含量〗：≥90%(HPLC)
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：粉末。溶于DMSO、DMF
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)適用于熒光性試驗(yàn)

硫酸*   古細(xì)菌 + 真細(xì)菌種屬鑒定 PCR Mix 3
多粘菌素 B 硫酸鹽   草桿菌 PCR Mix 4
硫酸*   高 GC 革氏陽性細(xì)菌 PCR Mix 5
親和素   鏈霉菌 PCR Mix 6
*   Poly r(A)
植酸鈉   Poly(I).Poly(C)
*紅   Percoll
脫落酸   Ficoll-Paque 介質(zhì)
*鈉   Deaza dGTP
碘代乙酰胺   雙脫氧 dNTP 套裝
亞鐵 ( 三水合 )   dNTP 和引物清除劑
2-(N- *啉 ) 乙磺酸   魯米諾
牛膽酸鈉   AMPPD
碘硝基四唑紫嘌呤   山羊抗小鼠 IgG(H+L), 堿性磷酸酶標(biāo)記
固藍(lán) RR 鹽   山羊抗兔 IgG(Fc)，堿性磷酸酶標(biāo)記
新生霉素   山羊抗人 IgG(H+L)，堿性磷酸酶標(biāo)記
L- *

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