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上海邦景實業有限公司
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雙脫氧 dNTP 套裝40uL×4原理運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。
雙脫氧 dNTP 套裝40uL×4原理產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
雙脫氧 dNTP 套裝40uL×4原理產品介紹:雙脫氧 dNTP 套裝40uL×4原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
雙脫氧 dNTP 套裝40uL×4原理按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗
〖保存〗:RT
噻唑橙
〖英文名稱〗:Thiazole Orange;1-Methyl-4-[(3-methyl-2(3H)-benzothiazolylidene)methyl]quinolinium p-tosylate
〖CAS號〗:107091-89-4
C26H24N2O3S2=476.61
〖級別〗:BR
有效分光〖含量〗:~90%
消光系數Extinction Coefficient:≥65000 (波長Wavelength501-513nm)
消光系數Extinction Coefficient:≥10000 (波長Wavelength286-290nm)
消光系數Extinction Coefficient:≥28000 (波長Wavelength235-239nm)
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:橙色或紅橙色粉末,〖熔點〗270℃
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗
〖保存〗:RT
2-氨基吖啶酮
〖英文名稱〗:AMAC;2-Aminoacridone;2-Ami0H-acridin-9-one
〖CAS號〗:27918-14-5
C13H10N2O=210.23
雙脫氧 dNTP 套裝40uL×4原理四氧嘧啶 Therminator II DNA 聚合酶
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庚烷磺酸鈉 一步法 96 孔板質粒 DNAout( 真空法 )
固綠 一步法96 孔板單菌落質粒DNAout( 真空法)
金胺 O 細胞計數液 (Vi-CELL 儀 )
乙酰丁香酮 Protein A+G 瓊脂糖
聚乙烯聚吡咯烷酮 即用型 GFP 標簽蛋白裂解液
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聚乙二醇 3350 WGA 糖蛋白分離試劑盒
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聚乙二醇 6000 小牛胸腺 DNA 溶液
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