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dCTP 溶液,100mM0.5mL實驗步驟

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更新時間:2017-01-19 14:13:31瀏覽次數:328次

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產品簡介

dCTP 溶液,100mM0.5mL實驗步驟運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

dCTP 溶液,100mM0.5mL實驗步驟產品介紹:
dCTP 溶液,100mM0.5mL實驗步驟產品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

〖英文名稱〗:Thioflavin T;Basic Yellow 1;Thioflavine T
〖其他名稱〗:堿性黃1;硫代磺素T;氯化2-[4-(二甲氨基)苯基]-3,6-二甲基苯并噻唑翁;硫代黃色素T;鹽基嫩黃;2-[4-(二甲基氨基)苯基]-3,6-二甲基苯并噻唑鎓〖氯化物〗;硫磺素T
〖CAS號〗:2390-54-7
C17H19ClN2S=318.86
〖級別〗:FMP
〖含量〗:≥75%
薄層層析試驗:合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:黃色或黃橙色結晶性粉末。極易溶于熱水,水溶液呈黃色,易溶于乙醇,呈黃色帶綠色熒光。zui大吸收波長412nm
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)昆蟲組織學染色
〖保存〗:RT
硫磺素S
〖英文名稱〗:Thioflavine S;Direct Yellow 7
〖其他名稱〗:四羥酮醇S;硫代磺素S;硫代黃色素S;直接黃7
〖CAS號〗:1326-12-1

3- 異丁基 -1- 甲基黃嘌呤    克必隆零背景 T 載體
咪唑    *溶液 ,50mg/mL
n- 辛基 -β-D- 吡喃葡萄糖苷    Klenow 片段 (3´ → 5´ exo-)
苦杏仁苷    牛血清白蛋白封堵液
氯化硝基四氮唑蘭    4% 多聚甲醛 (RNA )
噻唑蘭    4% 多聚甲醛
2,3,5 氯化三苯基四氮唑    Baker 甲醛鈣中性固定液
吩嗪硫酸甲酯    Lillie 甲醛中性固定液
3- 三 ( 羥甲基 ) 甲基 -3- 氨基丙烷磺酸    戊二醛磷酸緩沖固定液
脫氧膽酸鈉    戊二醛二甲鈉緩沖固定液
多聚甲醛    Zetterqvist 固定液
α- 酮戊二酸鈉    乙醇 - 甲醛固定液
四鹽酸精胺    多聚甲醛 - 磷酸緩沖固定液
5-  -5’- 脫氧尿苷    多聚甲醛 - 氫氧固定液
潮霉素 B    Maximov 固定液
    供體馬血清


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