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dCTP 溶液,2.5mM2mL說明書

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更新時間:2017-01-19 14:12:00瀏覽次數:407次

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產品簡介

dCTP 溶液,2.5mM2mL說明書運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

dCTP 溶液,2.5mM2mL說明書產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
dCTP 溶液,2.5mM2mL說明書合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

〖級別〗:Practical grade
λmax:360~380nm
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:黃色粉末。溶解度:1 mg/ml in water:ethanol (1:1)
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗
〖保存〗:RT
β-萘酚紫
〖英文名稱〗:β-Naphthol Violet
〖其他名稱〗:4-[[4-(苯甲酰氨基)-2-甲氧基-5-甲基苯基]偶氮]-3-羥基-N-苯基-2-萘甲酰胺
〖CAS號〗:7143-21-7
C16H9N3Na2O9S2=497.37
〖級別〗:BR
Lambda max:508~511nm(H2O)
Absorbance(E1%1cm):min. 520(5mg/L, H2O, 508~511nm)
Drying loss:≤10.0%
Sensitiveness:Pass

埃文斯藍    PLP 固定液
對硝基苯 -β-D- 吡喃半乳糖苷    PLPD 固定液
L- *鹽酸鹽    Methacarn 固定液
腺嘌呤硫酸鹽    PFG 固定液
酸性品紅    對苯醌固定液
α- 酮戊二酸    ECD-G 固定液
苯甲基磺酰    細胞周期與凋亡檢測試劑盒(PI 法)
異硫氰酸熒光素    Zamboni 固定液
亞精胺三鹽酸鹽    考馬斯亮藍 R-250 染液
6- 羧基二乙酸熒光素    DB3.1 感受態細胞
章魚堿    SYBR Green II 核酸染料
D- 甘露糖    酸水解酪素
二硫蘇糖醇 (DTT)    DMEM( 高糖 )
N- 苯甲酰 -L- *乙酯    DMEM( 低糖 )
5′ - 三磷酸鳥苷三鈉


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