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dGTP 溶液,2.5mM2mL原理

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更新時間:2017-01-19 14:10:04瀏覽次數:203次

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產品簡介

dGTP 溶液,2.5mM2mL原理運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

dGTP 溶液,2.5mM2mL原理產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
dGTP 溶液,2.5mM2mL原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

〖英文名稱〗:TMB-PS;TMB-N-Propane sulfonic acid sodium Salt;N-(3-Sulfopropyl)-3,3',5,5'-tetramethylbenzidine sodium salt
〖其他名稱〗:N-(3-磺丙基)-3,3',5,5'-四甲基聯苯胺鈉鹽;TMB丙磺酸鈉
〖CAS號〗:102062-36-2
C19H25N2NaO3S=384.47
〖級別〗:BR
純度:≥98%
〖熔點〗:220~251℃
摩爾吸收系數:≥43000(λmax213nm)
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:白色或淡黃色結晶。溶于水。一種水溶性的TMB類似物,無色水溶液在過氧化輕或過氧化物酶存在時變成藍綠色。zui大吸收波長:655nm
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)用于檢測過氧化輕或過氧化物酶活性
〖保存〗:2~8℃,避光
1,2-茚滿二酮
〖英文名稱〗:1,2-IND;1,2-Indanedione
〖其他名稱〗:1,2(3H)-氫化茚二酮;茚二酮
〖CAS號〗:16214-27-0

蛋白酶 K    Y2HGold 酵母化學感受態細胞
DEAE 葡聚糖凝膠 A-50    T1 感受態細胞
5- 磷酸吡哆醛,一水    植物 RNA 提取高鹽溶液
蘇丹 B    克必隆平末端克隆試劑盒(組成型)
對硝基苯磷酸二鈉鹽    Flemming 固定液
萘酚 AS-TR 磷酸鹽    Orth 固定液
熒光增白劑 28    BL21 感受態細胞
金精三羧酸    M15 感受態細胞
5'- 單磷酸腺苷二鈉    OmniMAX2-T1 Phage Resistant 感受態細胞
*    XL10-Gold 感受態細胞
核苷酸類似物法易錯 P


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