dITP 溶液，100mM0.5mL實驗方法

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更新時間：2017-01-19 14:04:57瀏覽次數：220次

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產品簡介

dITP 溶液，100mM0.5mL實驗方法運輸及保存低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細介紹

dITP 溶液，100mM0.5mL實驗方法合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶（含 RI），反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
dITP 溶液，100mM0.5mL實驗方法按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶（含 RI），反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現 1.1Kb 的片段（如果使用隨機引物，將出現多個小片段）。

產品介紹：
產品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶，內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：棕紅色粉末。溶于水、氨,也溶于溶液及明礬溶液,不溶于乙醇、甘油和丁香油。zui大吸收波長 534(376)nm
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)膠質、樹膠、動物組織和細菌染色
〖保存〗：RT
酸性橙12
〖英文名稱〗：Acid Orange 12；Ponceau 4G
〖其他名稱〗：6-羥基-5-(苯偶氮基)-2-萘磺酸單鈉鹽；梔子黃色素；藏花橙G；酸性橙-12；煌橙
〖CAS號〗：1934-20-9
C16H11N2NaO4S=350.32
〖級別〗：BS
Maximum UV absorption：482 nm
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：橙色至紅色粉末，溶于水和乙醇
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗
〖保存〗：RT
5(6)-羧基熒光素
〖英文名稱〗：5(6)-FAM；5(6)-Carboxyfluorescein
〖其他名稱〗：CF-羧基熒光素；5(6)-羧酸熒光素
〖CAS號〗：72088-94-9
C21H12O7=376.32
〖級別〗：BR
純度：≥95%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：桔黃色粉末
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)在堿性條件下有強烈的綠色熒光，熒光探針材料，廣泛應用于熒光分析、示蹤染料、 PH 指示劑及合成羧基熒光素的衍生物等
〖保存〗：RT
酸性艷紅
〖英文名稱〗：Acid brilliant red

D- * ( 維生素 H)   真空抽濾盒
D(+) 木糖   ApaI
尿苷   0.5 mL RNase-free 離心管
堿性品紅   BamHI
維生素 E   1.5 mL RNase-free 離心管
甜菜堿鹽酸鹽   BglII
氨甲喋呤   2.0 mL RNase-free 離心管
5- 溴 -2'- 脫氧尿苷   DpnI
D- 半乳糖   10 μL RNase-free 白吸頭 ( 袋裝 )
*   EcoRI
L- *鹽酸鹽   10 μL RNase-free 白吸頭 ( 袋裝長尖 )
異硫氰酸胍   10 μL RNase-free 白吸頭 ( 袋裝帶芯 )
維生素 B1   EcoRV
-β-D- 葡糖苷酸