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上海邦景實業有限公司
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dITP 溶液,100mM0.5mL實驗方法運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。
dITP 溶液,100mM0.5mL實驗方法合成建文庫用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
dITP 溶液,100mM0.5mL實驗方法按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:棕紅色粉末。溶于水、氨,也溶于溶液及明礬溶液,不溶于乙醇、甘油和丁香油。zui大吸收波長 534(376)nm
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)膠質、樹膠、動物組織和細菌染色
〖保存〗:RT
酸性橙12
〖英文名稱〗:Acid Orange 12;Ponceau 4G
〖其他名稱〗:6-羥基-5-(苯偶氮基)-2-萘磺酸單鈉鹽;梔子黃色素;藏花橙G;酸性橙-12;煌橙
〖CAS號〗:1934-20-9
C16H11N2NaO4S=350.32
〖級別〗:BS
Maximum UV absorption:482 nm
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:橙色至紅色粉末,溶于水和乙醇
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗
〖保存〗:RT
5(6)-羧基熒光素
〖英文名稱〗:5(6)-FAM;5(6)-Carboxyfluorescein
〖其他名稱〗:CF-羧基熒光素;5(6)-羧酸熒光素
〖CAS號〗:72088-94-9
C21H12O7=376.32
〖級別〗:BR
純度:≥95%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:桔黃色粉末
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)在堿性條件下有強烈的綠色熒光,熒光探針材料,廣泛應用于熒光分析、示蹤染料、 PH 指示劑及合成羧基熒光素的衍生物等
〖保存〗:RT
酸性艷紅
〖英文名稱〗:Acid brilliant red
D- * ( 維生素 H) 真空抽濾盒
D(+) 木糖 ApaI
尿苷 0.5 mL RNase-free 離心管
堿性品紅 BamHI
維生素 E 1.5 mL RNase-free 離心管
甜菜堿鹽酸鹽 BglII
氨甲喋呤 2.0 mL RNase-free 離心管
5- 溴 -2'- 脫氧尿苷 DpnI
D- 半乳糖 10 μL RNase-free 白吸頭 ( 袋裝 )
* EcoRI
L- *鹽酸鹽 10 μL RNase-free 白吸頭 ( 袋裝長尖 )
異硫氰酸胍 10 μL RNase-free 白吸頭 ( 袋裝帶芯 )
維生素 B1 EcoRV
-β-D- 葡糖苷酸
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