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上海邦景實業有限公司
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dITP 溶液，2.5mM2mL實驗步驟運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
dITP 溶液，2.5mM2mL實驗步驟產品介紹：
dITP 溶液，2.5mM2mL實驗步驟產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶，內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提 供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
合成建文庫用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶（含 RI），反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶（含 RI），反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現 1.1Kb 的片段（如果使用隨機引物，將出現多個小片段）。
〖級別〗：BS
〖含量〗：≥85%
染色試驗：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：紅色粉末
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗
〖保存〗：RT
活性大紅
〖英文名稱〗：Active red
〖級別〗：BS
〖含量〗：≥85%
染色試驗：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：紅色粉末
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗
〖保存〗：RT
堿性紅 1:1
〖英文名稱〗：Basic Red 1:1；C.I. 45161；3,6-Bis(ethylamino)-9-[2-(methoxycarbonyl)phenyl]-2,7-dimethylxanthylium chloride
〖其他名稱〗：3,6-二(乙氨基)-9-[2-(甲氧羰基)苯基]-2,7二甲基氯化占噸翁；陽離子紅1:1
〖CAS號〗：3068-39-1
C27H29N2O3.Cl=464.98
〖級別〗：BS
二乙酸熒光素 10 μL RNase-free 白吸頭 ( 袋裝帶芯長尖 )
* HindIII
* A 10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝 )
α- 乳糖 HinfI
3-(3,4- 二羥基苯 )-L- * 10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝長尖 )
乙二胺四乙酸 (EDTA) KpnI
L- * 10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝已滅菌 )
β- 基乙醇 Mlu
氯化乙酰* 10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝已滅菌長尖 )
4- 氯 -1- 萘酚 MboI
* 10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝已滅菌帶芯 )
3,5 二硝基水楊酸 NcoI
L- *鈉 10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝已滅菌帶芯長尖 )
琥珀酸鈉，六水 200 μL RNase-free 黃吸頭 ( 袋裝 )
二甲基鈉 NdeI
檸檬酸鈉，二水 200 μL RNase-free 黃吸頭 ( 袋裝帶芯 )
D- 海藻糖 NotI
4- 甲基傘形酮
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