綠如藍(lán)染料,PCR 級(jí)0.1mL實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶,內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
綠如藍(lán)染料,PCR 級(jí)0.1mL實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品介紹:
合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)R坏?RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標(biāo)記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段(如果使用隨機(jī)引物,將出現(xiàn)多個(gè)小片段)。
〖英文名稱〗:D-Panthenol ;Dexpanthenol;(+)-Panthenol;(R)-(+)-2,4-Dihydroxy-N-(3-hydroxypropyl)-3,3-dimethylbutyramide;(R)-2,4-Dihydroxy-3,3-dimethylbutyric 3-hydroxypropylamide; D-Pantothenyl alcohol;Provitamin B
〖其他名稱〗:右旋泛醇;(R-)2,4-二羥基-N-(3-羥基丙基)-3,3-二甲基丁酰胺;D-(+)-2,4-二羥基-N-(3-羥丙基)-3,3-二甲基丁酰胺;*;右旋泛酰醇;D-泛酰醇;維生素原B5
〖CAS號(hào)〗:81-13-0
C9H19NO4=205.25
〖級(jí)別〗:AR
〖含量〗:≥98.0%
〖比旋光度〗:+29.0~+31.5o
水分:≤1.0%
〖灼燒殘?jiān)剑?le;0.1%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:液體。在水溶液中較穩(wěn)定,但長(zhǎng)時(shí)間加熱引起外消旋作用。溶于水,乙醇,甲醇,氯方,微溶于乙迷。不溶于脂肪和油。密度:1.20,沸點(diǎn):118-120℃
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗
〖保存〗:RT
麥芽糖醇
〖英文名稱〗:Maltitol;4-O-alpha-Glucopyranosyl-D-sorbitol;4-O-alpha-D-Glucopyranosyl-D-glucitol
〖其他名稱〗:氫化麥芽糖;4-O-alpha-吡喃葡萄糖基-D-山梨糖醇;4-O-2-D-乙二醇吡喃山絮糖醇
〖CAS號(hào)〗:585-88-6
C12H24O11=344.31
〖級(jí)別〗:BR
純度:≥98.0%
〖干燥失重〗:≤1.0%
麥芽提取物 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 -2
加拿大樹膠 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 - 不含動(dòng)物成分
牛膽粉 動(dòng)物上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子
豬膽鹽 肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子
酵母粉 骨骼肌細(xì)胞生長(zhǎng)因子
酵母浸膏 色素細(xì)胞生長(zhǎng)因子
膽酸 色素細(xì)胞生長(zhǎng)因子 - 不含 TPA
羅丹明 B 滑膜細(xì)胞生長(zhǎng)因子
乙酸- 1 -萘脂 間充質(zhì)干細(xì)胞成骨細(xì)胞分化生長(zhǎng)因子
QAE 葡聚糖凝膠 A-50 間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨細(xì)胞分化生長(zhǎng)因子
脫氧膽酸 間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)因子
魚藤酮 間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)因子 - 無血淸
植酸 間充質(zhì)干細(xì)胞脂防細(xì)胞分化生長(zhǎng)因子
核黃素 角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子
胃粘膜素 角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子
崩潰酶 角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子 - 不含 BPE
蘇丹Ⅲ 角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子 - 不含動(dòng)物成分
纖連蛋白 ( 人血 ) 口腔角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子
3,3’- 二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸 卵巢上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子
α -萘乙酸 內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子
吲哚 -3- 乙酸 腦膜細(xì)胞生長(zhǎng)因子
L- 山梨糖 尿道上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子
肌醇 平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)因子
星形膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子