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石蠟油,PCR 級10mL實驗方法

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更新時間:2017-01-19 13:49:16瀏覽次數:500次

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產品簡介

石蠟油,PCR 級10mL實驗方法運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

石蠟油,PCR 級10mL實驗方法產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
石蠟油,PCR 級10mL實驗方法產品介紹:
合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

核糖核酸酶 A,牛胰    DiBAC4(3)
核糖核酸酶 B    Dihydroethidium( 超氧化物陰離子熒光探針 )
*    Dihydrorhodamine 123 
* 1:250    DiI( 細胞膜紅色熒光探針 )
*脫羧酶    DiIC1(5) 碘化物
多酚氧化酶 ( 菌菇 )    DiIC12(3) 高氯酸化物
尿酸酶    DiO( 細胞膜綠色熒光探針 )
脲酶 ( 尿素酶 巨豆 )    DiOC6(3) 碘化物
黃嘌呤氧化酶    ER-Tracker Red( 內質網紅色熒光探針 )
瓊脂粉    Fluo-3AM( 鈣離子熒光探針 )
*    Fluo-3,五銨鹽
曲拉通 X-100    Fluorescein-5-maleimide
聚乙烯亞胺    Fura-2 AM( 鈣離子熒光探針 )
聚乙烯吡咯烷酮 40000    Fura-2,五銨鹽
聚乙烯吡咯烷酮 K-30    Golgi-Tracker Red( 高爾基體紅色熒光探針 )
聚乙烯吡咯烷酮 K360    Hydroxystilbamidine 
脫氧核糖核酸酶 ( 牛胰 )    Indo-1 AM
辣根過氧化物酶    Indo-1,五銨鹽

分子量:300~2000
〖級別〗:BR
〖含量〗(干基):≥95.0% 
PH:3.5~6.5
灰分:≤0.3%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:無色至淺棕色液體或白色粉末。由2-7個木糖以β-1,4-糖苷鍵相結合的二糖至七糖的混合物。其中木二糖約占40%。糖漿為淺黃色粘稠狀液體。相對甜度約為40%,甜感與蔗糖相同。耐熱、耐酸(Ph2.5-8.0,120℃,1h),無破壞,在Ph2.5-8.0和37℃下貯藏90天無任何變化
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。
〖保存〗:RT
低聚半乳糖
〖英文名稱〗:GOS;Galacto-Oligosaccharides
〖級別〗:BR
低聚半乳糖〖含量〗:≥57.0%
無水乳糖〖含量〗(干基):≤23.0%
*〖含量〗(干基):≤22.0
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:白色或類白色粉末,是蔗糖分子的葡萄糖基以α-1,6鍵,分別連接了1-3個半乳糖分子構成的功能性復合寡糖。是以6,半乳糖基乳糖為主要成分的生理活性低聚糖
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。
〖保存〗:RT


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