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MnCl2溶液,25mM,PCR 級5mL原理

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更新時間:2017-01-19 13:44:31瀏覽次數:407次

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產品簡介

MnCl2溶液,25mM,PCR 級5mL原理運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

MnCl2溶液,25mM,PCR 級5mL原理產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
MnCl2溶液,25mM,PCR 級5mL原理產品介紹:

合成建文庫用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

硫酸葡聚糖    Camptothecin( * )
瓊脂糖    Canavanine,sulfate(iNOS 抑制劑 )
瓊脂糖凝膠 4B    Carboxy-PTIO( 一氧化氮清除劑 )
纖維素酶    Carboxy-PTIO( 一氧化氮清除劑 )
鏈親和素    Ac-DEVD-CHO(Caspase3 抑制劑 )
DEAE 纖維素    Catalase( 抗氧化酶 )
微球菌核酸酶    Catechin hydrate( 抗氧化劑 )
木聚糖    Cisplatin(DNA 交聯劑 / 細胞凋亡誘導劑 )
天*酶    Cycloheximide
DEAE 葡聚糖    Cyclosporin A( 免疫抑制劑 /PP2B 抑制劑 )
濕潤劑 P-40    Decitabine *
醛縮酶    Doxorubicin(Adriamycin) *
羧肽酶 B( 豬胰 )    Etoposide( * / 鬼臼乙叉苷 )
半纖維素酶    Forskolin( 腺苷酸環化酶激活劑 )

〖級別〗:BR
純度:≥85.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:類白色或淡黃色或褐色粉末,天然物,角藻提取,溶于水:10mg/ml
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。
〖保存〗:RT
菊糖
〖英文名稱〗:Inulin 
〖其他名稱〗:菊粉;菊淀粉;旋復花粉;土木香粉;阿蘭粉;吲酮
〖CAS號〗:9005-80-5或39289-43-5
分子式:(C6H10O5)n
分子量:~5000
〖級別〗:BR
70~175℃


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