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高 GC DNA 清除劑,PCR 級1.5mL實(shí)驗(yàn)方法

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

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更新時(shí)間:2017-01-19 13:43:33瀏覽次數(shù):252次

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產(chǎn)品簡介

高 GC DNA 清除劑,PCR 級1.5mL實(shí)驗(yàn)方法運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細(xì)介紹

高 GC DNA 清除劑,PCR 級1.5mL實(shí)驗(yàn)方法合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)R坏?RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
高 GC DNA 清除劑,PCR 級1.5mL實(shí)驗(yàn)方法按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標(biāo)記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機(jī)引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段(如果使用隨機(jī)引物,將出現(xiàn)多個(gè)小片段)。

產(chǎn)品介紹:

產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶,內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

DNA 酶,Ⅱ型    Genistein( *蛋白激酶抑制劑 )
磷酸二酯酶Ⅰ    Glucosamine( 胰島素抵抗誘導(dǎo)劑 )
*酯酶    GSH( 抗氧化劑 )
核糖核酸酶 T1    H-89.2HCL(PKA 抑制劑 )
腺苷脫氨酶    H-89(PKA 抑制劑 )
梭菌蛋白酶    HDAC 抑制劑
半乳糖氧化酶    Hemoglobin(NO 清除劑 )
*脫氫酶    Insulin
β- 半乳糖苷酶    Ionomycin( 鈣離子載體 )
乙醇脫氫酶    KT5823(PKG 抑制劑 )
離析酶 R-10    L-Arginine(NO 前體 )
果膠酶    L-Canavanine(iNOS 抑制劑 )
果膠酶 Y-23    L-Citrulline(NO 中間體 )

〖含量〗:≥90%
葡萄糖:≤3.0%
蔗糖:≤3.0%
溶解性(25℃):12~13g/100ml
PH:4.0~6.0 
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:淡黃色粉末,天竺葵塊莖提取,無氣味,無味,能被酸水解成果糖和葡萄糖。有吸濕性,溶于熱水,微溶于冷水和有機(jī)溶劑。〖相對密度〗(d204)1.35,〖熔點(diǎn)〗178℃(分解),〖比旋光度〗-40°(c=2,水中)。以果糖為單位聚合而成的一種多糖類。是果聚糖中zui主要的糖類。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)培養(yǎng)基、菊糖耐量試驗(yàn)
〖保存〗:RT
D-甘露糖胺鹽酸鹽
〖英文名稱〗:D-Mannosamine hydrochloride;2-Amino-2-deoxy-D-mannose hydrochloride
〖其他名稱〗:鹽酸D-甘露糖胺;D-甘露糖氨鹽酸鹽;氨基甘露糖鹽酸鹽
〖CAS號〗:5505-63-5 
C6H13NO5?HCl=215.63
〖級別〗:BioChemika
純度:≥98.0% 
〖熔點(diǎn)〗:1


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