MgCl2溶液，25mM，PCR 級5mL實驗步驟

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更新時間：2017-01-19 13:40:10瀏覽次數(shù)：292次

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產(chǎn)品分類 品牌分類

  核酸擴增產(chǎn)品

常用PCR引物

種屬鑒定PCR Mix

單細胞擴增

其他擴增試劑盒

LAMP擴增

全基因組擴增（WGA）

即用型RT-PCR

RT

即用型PCR

PCR成分及添加劑

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上海邦景實業(yè)有限公司

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產(chǎn)品簡介

MgCl2溶液，25mM，PCR 級5mL實驗步驟運輸及保存低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細介紹

MgCl2溶液，25mM，PCR 級5mL實驗步驟產(chǎn)品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標記等。
MgCl2溶液，25mM，PCR 級5mL實驗步驟產(chǎn)品介紹：

合成建文庫用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機引物，將出現(xiàn)多個小片段）。

瓊脂糖凝膠 2B   Nutlin-3(MDM2 拮抗劑 )
超氧化物歧化酶   Okadaic acid 鉀鹽 (PP1 和 PP2A 抑制劑 )
組蛋白   Paclitaxel(TAXOL)( * )
核酸組蛋白 ( 小牛胸腺 )   PD 98059(MAPKK 抑制劑 )
透明質(zhì)酸鈉   PDTC(NF-κB 抑制劑 / 抗氧化劑 )
磷酸二酯酶Ⅱ   Phorbol12-myristate13-acetate(PKC 激活劑 )
*   Pifithrin-a(p53 抑制劑 )
*   PMA/TPA (PKC 激活劑 )
牛肉蛋白胨   Pyrrolidinedithioca rbamin acid.ammonium salt(NF-kB 抑制劑 / 抗氧化劑 )
蛋白胨   Rapamycin(FRAP/mTOR 抑制劑 )
酶水解酪素   SB203580(p38MAPK 抑制劑 )
D- 半乳糖醛酸   Simvastatin(HMG-CoA Reductase 抑制劑 )

〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。
〖保存〗：RT
松三糖
〖英文名稱〗：D-(+)-Melezitose monohydrate；O-α-D-Glucopyranosyl-(1→3)-β-D-fructofuranosyl-α-D-glucopyranoside
〖其他名稱〗：D(+)松三糖一水合物
〖CAS號〗：207511-10-2或10030-67-8
C18H32O16 · H2O=522.45
〖級別〗：試劑級
〖含量〗：≥99.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：白色結(jié)晶粉末，溶于水，微溶于醇。兩分子葡萄糖及一分子果糖組成的三糖，由水溶液中可得其含二分子水的結(jié)晶，在110o時失水得無水結(jié)晶。不能還原費林(H.von Fehling)試劑
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)微生物學(xué)研究
〖保存〗：RT
D-(-)水楊苷
大豆低聚糖；

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