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MgCl2溶液,25mM,PCR 級5mL實驗步驟

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更新時間:2017-01-19 13:40:10瀏覽次數:291次

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產品簡介

MgCl2溶液,25mM,PCR 級5mL實驗步驟運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

MgCl2溶液,25mM,PCR 級5mL實驗步驟產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
MgCl2溶液,25mM,PCR 級5mL實驗步驟產品介紹:

合成建文庫用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

瓊脂糖凝膠 2B    Nutlin-3(MDM2 拮抗劑 )
超氧化物歧化酶    Okadaic acid 鉀鹽 (PP1 和 PP2A 抑制劑 )
組蛋白    Paclitaxel(TAXOL)( * )
核酸組蛋白 ( 小牛胸腺 )    PD 98059(MAPKK 抑制劑 )
透明質酸鈉    PDTC(NF-κB 抑制劑 / 抗氧化劑 )
磷酸二酯酶Ⅱ    Phorbol12-myristate13-acetate(PKC 激活劑 ) 
*    Pifithrin-a(p53 抑制劑 )
*    PMA/TPA (PKC 激活劑 )
牛肉蛋白胨    Pyrrolidinedithioca rbamin acid.ammonium salt(NF-kB 抑制劑 / 抗氧化劑 )
蛋白胨    Rapamycin(FRAP/mTOR 抑制劑 )
酶水解酪素    SB203580(p38MAPK 抑制劑 )
D- 半乳糖醛酸    Simvastatin(HMG-CoA Reductase 抑制劑 )

〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。
〖保存〗:RT
松三糖
〖英文名稱〗:D-(+)-Melezitose monohydrate;O-α-D-Glucopyranosyl-(1→3)-β-D-fructofuranosyl-α-D-glucopyranoside 
〖其他名稱〗:D(+)松三糖一水合物 
〖CAS號〗:207511-10-2或10030-67-8 
C18H32O16 · H2O=522.45
〖級別〗:試劑級
〖含量〗:≥99.0%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:白色結晶粉末,溶于水,微溶于醇。兩分子葡萄糖及一分子果糖組成的三糖,由水溶液中可得其含二分子水的結晶,在110o時失水得無水結晶。不能還原費林(H.von Fehling)試劑
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)微生物學研究
〖保存〗:RT
D-(-)水楊苷
大豆低聚糖;


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