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上海邦景實業有限公司
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PCR 優化試劑盒1套實驗步驟運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
PCR 優化試劑盒1套實驗步驟產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶，內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提 供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
PCR 優化試劑盒1套實驗步驟產品介紹：
合成建文庫用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶（含 RI），反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶（含 RI），反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現 1.1Kb 的片段（如果使用隨機引物，將出現多個小片段）。
5637(人膀胱癌細胞) 5×106cells/瓶×2
293A (人胚腎細胞) 5×106cells/瓶×2
22RV1(人前列腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
293T(人胚腎細胞) 5×106cells/瓶×2
3T3-L1(小鼠胚胎成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2
4T1(小鼠癌細胞) 5×106cells/瓶×2
6T-CEM (人T細胞白血病細胞) 5×106cells/瓶×2
769-P(人腎細胞腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
786-O(人腎透明細胞癌細胞) 5×106cells/瓶×2
95-D(人高轉移肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
A172(人腦膠質瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
A2780(人卵巢癌細胞) 5×106cells/瓶×2
A-375(人惡性黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
A-431(人表皮癌細胞) 5×106cells/瓶×2
A549(人非小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
A673(人橫紋肌瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
A9(小鼠皮下結締組織細胞) 5×106cells/瓶×2
AAV-293(人胚腎細胞) 5×106cells/瓶×2
Acc-2(人涎腺腺樣囊性癌細胞) 5×106cells/瓶×2
ACHN(人腎癌細胞) 5×106cells/瓶×2
AGS(人胃腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
Ana-1(小鼠巨噬細胞) 5×106cells/瓶×2
Anglne(人卵巢癌細胞) 5×106cells/瓶×2
ASBT 頂膜鈉依賴性膽鹽轉運體蛋白抗體
ADAM8 去整合素樣金屬蛋白酶8抗體
AADACL3 芳香乙酰胺脫乙酰基酶樣蛋白3抗體
ACN9 ACN9蛋白抗體
ADAR1 (N-terminus) 雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體（N端）
AMPK alpha 2 腺苷單磷酸活化蛋白激酶α2抗體
ADK 腺苷酸激酶抗體
A2ML1 α2巨球蛋白樣蛋白1抗體 α2ML1
3-Apr 細胞凋亡相關蛋白3抗體
Actin 肌動蛋白α/α-SMA/α Actin抗體
ABCB7 ATP結合蛋白家族7抗體
ASCL2 ASCL2蛋白抗體
phospho-Ataxin 1(Ser775) 磷酸化脊髓小腦失調癥蛋白1抗體
phospho-ATF1 (Ser63) 磷酸化活化轉錄因子1抗體
phospho-ATF2 (Ser480) 磷酸化活化復制因子2抗體
phospho-ATF2 (Thr51 + Thr53) 磷酸化活化復制因子2抗體
phospho-ATF2 (Thr69 + Thr51) 磷酸化活化復制因子2抗體
phospho-ATF2 (Thr73 + Thr55) 磷酸化活化復制因子2抗體
phospho-ATF2 (Thr71 + Thr53) 磷酸化活化復制因子2抗體
phospho-ATF2(Thr71) 磷酸化活化復制因子2抗體
ATF5 活化轉錄因子5抗體
ATF6 beta 活化轉錄因子6β抗體
ATIC AICAR甲?；D移酶抗體
phospho-ATM (Ser794) 磷酸化毛細血管擴張性共濟失調癥突變蛋白抗體
ATP5E ATP5E蛋白抗體
ATP5G2 ATP5G2蛋白抗體
ATP6V0D2 ATP6V0D2蛋白抗體
ATP6V1B2 ATP6V1B2蛋白抗體
ATPIF1 ATPIF1蛋白抗體
Attractin Attractin蛋白抗體
Phospho-Aurora B(Tyr12) 磷酸化有絲分裂激酶B抗體
ARPM1 肌動蛋白相關蛋白M1抗體
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