微量 RNA 定量試劑盒1mL實驗步驟

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更新時間：2017-01-18 17:00:45瀏覽次數(shù)：403次

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產(chǎn)品簡介

微量 RNA 定量試劑盒1mL實驗步驟運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細介紹

微量 RNA 定量試劑盒1mL實驗步驟磷酸化反應(yīng)（前反應(yīng)）：
1. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：

2. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應(yīng)的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標記：
當摻入水平很低的時候，需要使用本步驟，即通過體積排阻色譜或過濾試劑盒除去未反應(yīng)的標記。Sephadex G-50 層析柱（需另購）對于去除未摻入的 dNTPs 效果很好，它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5～10 分鐘以使 T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個堿基的寡核苷酸。

微量 RNA 定量試劑盒1mL實驗步驟使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實驗前需自備的試劑：7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：成分加入的體積自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應(yīng)緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 滅菌的超純水補足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5～10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
7. 離心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。注：通過第 5～8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP，如要 *將其除去時，乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽提除去蛋白質(zhì)時，請在第
8 步之后進行。
產(chǎn)品介紹：

磷酸化反應(yīng)標記：
A. 去磷酸化反應(yīng)
1. 實驗前需自備的試劑：TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：成分加入的體積自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶（CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 滅菌的超純水補足到 150 μL
3. 50℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//（25：24：1），充分混勻。
5. 離心，取上層（水層）移到另一個微量離心管中。
6. 重復(fù)操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui終濃度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
9. 離心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。

柱式探針純化試劑盒   10 次   親和素
Sephadex G50 介質(zhì)   10mL   *
超快核酸轉(zhuǎn)膜試劑盒   5次   植酸鈉
核酸印跡膜染液   100mL   *紅
超雜交液 A（不含甲酰胺）   100mL   脫落酸
超雜交液 B（含甲酰胺）   100mL   *鈉
超雜交液 (Oligo 探針 )   10mL   碘代乙酰胺
超雜交液 ( 芯片 )   10mL   亞鐵 ( 三水合 )
超雜交液 ( 原位雜交 )   10mL   2-(N- *啉 ) 乙磺酸
DNA 探針變性液   10mL   牛膽酸鈉
SSC 溶液 ,20×   100mL   碘硝基四唑紫嘌呤
SSPE 溶液 ,20×   100mL   固藍 RR 鹽

Pyrene嵌二奈10克LR，98%
CALCIUMHYDROXIDE氫氧化鈣美國藥典級白色至米白色粉末RTsigma
PTH1-34重組人甲狀旁腺激素1-34500毫克BR，95%
SODIUMACETATE,TRIHYDRATE醋酸鈉,三水ACS級白色晶體至白色結(jié)晶粉末RTsigma
Procyanidin原花青素500微升CP，35%
CALCIUMCHLORIDE,DIHYDRATE氯化鈣,二水ACS級白色精細粉末RTsigma
Potassiumsodiumtartratetetrahydrate洛瑟爾氏鹽500毫克CP，98%
SAFRANINO番紅O 生物染料級紅棕色至紫紅色粉末RTsigma
Potassiumfluoaluminate氟化鋁鉀100克BR，97%
SUDANBLACKB(FASTBLACKHB)蘇丹高純級棕色粉末RTsigma
Polyphenoloxidase*酶100克BR，0.4～1u/mg，液體
CYTIDINE-5'-TRIPHOSPHATE,TRISODIUMSALT(CTP)胞苷-5’-三嶙酸超純級白色結(jié)晶FROZENsigma
Platinum(IV)oxide無水氧化鉑1克BR，99%
FERRICSULFATEHYDRATE鐵,無水試劑級黃色精細結(jié)晶粉末RTsigma
p-Hydroxybenzoicacid4-羥基苯酸0.25毫升超純，99%
DNASEI脫

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