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微量雙鏈 DNA 定量試劑盒1mL說明書

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微量雙鏈 DNA 定量試劑盒1mL說明書運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

微量雙鏈 DNA 定量試劑盒1mL說明書使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑：7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：成分加入的體積自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應(yīng)緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 滅菌的超純水補(bǔ)足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長(zhǎng) 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5～10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做乙醇沉淀時(shí)使其終濃度達(dá) 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
7. 離心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。注：通過第 5～8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP，如要 *將其除去時(shí)，乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽提除去蛋白質(zhì)時(shí)，請(qǐng)?jiān)诘?br />8 步之后進(jìn)行。
微量雙鏈 DNA 定量試劑盒1mL說明書產(chǎn)品介紹：

磷酸化反應(yīng)標(biāo)記：
A. 去磷酸化反應(yīng)
1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑：TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：成分加入的體積自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶（CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 滅菌的超純水補(bǔ)足到 150 μL
3. 50℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//（25：24：1），充分混勻。
5. 離心，取上層（水層）移到另一個(gè)微量離心管中。
6. 重復(fù)操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui終濃度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
9. 離心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
磷酸化反應(yīng)（前反應(yīng)）：
1. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液：

2. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應(yīng)的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標(biāo)記：
當(dāng)摻入水平很低的時(shí)候，需要使用本步驟，即通過體積排阻色譜或過濾試劑盒除去未反應(yīng)的標(biāo)記。Sephadex G-50 層析柱（需另購）對(duì)于去除未摻入的 dNTPs 效果很好，它還能大幅減少小于 20 個(gè)堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5～10 分鐘以使 T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長(zhǎng)度不小于 10 個(gè) 堿基的寡核苷酸。

硝酸纖維素膜，13×20cm   1張   反玉米素
尼龍膜，13×20cm   1張   赤蘚紅 B 二鈉鹽
分子雜交爐   1臺(tái)   乙烯利
紫外交聯(lián)儀   1臺(tái)   芐瞇鹽酸鹽
雜交管 (35×100mm)   1個(gè)   快流速 DEAE- 瓊脂糖凝膠
雜交管 (35×200mm)   1個(gè)   伊紅 Y 二鈉鹽，水溶性
雜交管 (35×300mm)   1個(gè)   γ- 環(huán)狀糊精
雜交袋   20 個(gè)   D- 棉子糖
天凈沙非同位素探針雜交試劑盒   5次   D- 氨基半乳糖鹽酸鹽
天凈沙非同位素探針雜交試劑盒   5次   1,4- 雙 (5- 苯基 -2- 噁唑基 ) 苯
BCIP-NBT 法雜交檢測(cè)試劑盒   5次   1,4- 雙 (5- 苯基 -2- 噁唑基 ) 苯

SODIUMPHOSPHATE,MONOBASIC,MONOHYDRATE 嶙酸二氫鈉,一水ACS級(jí)白色結(jié)晶粉末RTsigma
N-Cbz-D-asparticAcidN-芐氧羰基-D-天冬氨酸25克特純，98%
SODIUMIODIDE超純級(jí)白色結(jié)晶粉末RTsigma
N-Acetyl-L-phenylalanineN-乙酰-L-α-氨基氫化肉桂酸25克BR，99%
BCIPp-TOLUIDINESALT對(duì)甲苯胺藍(lán)超純級(jí)白色結(jié)晶粉末FROZENsigma
N,N-Diethylformide二乙基甲先胺1克食品級(jí)
ISOPROPYLALCOHOL異丙醇生物技術(shù)級(jí)透明無色液體RT不sigma
MSP嶙酸一鈉5克AR，98%
URIDINE尿苷超純級(jí)白色結(jié)晶粉末RTsigma
MIPK3-甲基-25克BR
POTASSIUMSULFATE,ANHYDROUS無水鉀ACS級(jí)白色結(jié)晶RTsigma
Methylredsodiumsalt甲基紅鈉鹽100克超純，99%
RIBOZOLME(MICROENRICHED)RIBOZOL ME粉色至深粉色透明液體RTsigma
Mepiquatchloride助壯素1克高純，99%
格：25克