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上海邦景實業有限公司
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天凈沙非同位素探針雜交試劑盒5次實驗步驟運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
天凈沙非同位素探針雜交試劑盒5次實驗步驟產品介紹：
天凈沙非同位素探針雜交試劑盒5次實驗步驟使用方法:
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑：7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液： 成分 加入的體積 自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 滅菌的超純水 補足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5～10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
7. 離心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注：通過第 5～8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP，如要 *將其除去時，乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質時，請在第
8 步之后進行。
磷酸化反應標記：
A. 去磷酸化反應
1. 實驗前需自備的試劑：TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量離心管中制備下列反應液： 成分 加入的體積 自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶 （CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 滅菌的超純水 補足到 150 μL
3. 50℃反應 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//（25：24：1），充分混勻。
5. 離心，取上層（水層）移到另一個微量離心管中。
6. 重復操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui終濃度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
9. 離心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。
10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
磷酸化反應（前反應）：
1. 在微量離心管中制備下列反應液：
2. 37℃反應 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標記：
當摻入水平很低的時候，需要使用本步驟，即通過體積排阻色譜或過濾試 劑盒除去未反應的標記。Sephadex G-50 層析柱（需另購）對于去除未摻入 的 dNTPs 效果很好，它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5～10 分鐘以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個 堿基的寡核苷酸。
接頭 DNA(pSma I) 5nmol 交聯瓊脂糖凝膠 6B
EcoR I-Not I-BamH I 接頭 1nmol 溴甲酚綠
Oligo 快速復性液，10× 1mL 羅丹明 123
裂殖酵母化學感受態細胞制備試劑盒 20 次 玫瑰紅鈉鹽
裂殖酵母化學感受態細胞制備試劑盒 ( 含轉化液 ) 20 次 亮綠
酵母化學感受態細胞制備試劑盒 20 次 1,4- 雙丙烯酰
酵母化學感受態細胞制備試劑盒 ( 含轉化液 ) 20 次 6- 羥基多巴胺
酵母電轉感受態細胞制備試劑盒 20 次 麥芽糖
高效 E.coli 感受態細胞制備試劑盒 20 次 L- *
高效農桿菌感受態細胞制備試劑盒 20 次 L- 苯*
DH5α 化學感受態細胞 0.1mL×10 3,3’,5,5’- 四甲基聯苯胺二鹽酸
3-硝基苯，英文名或英文縮寫：3-Nitroaniline，級別：高純，75%，規格：25毫克
PEPSTATIN*抑制劑超純級25MG26305-03-3COLD
二甲基二氨基呫噸基氯，英文名或英文縮寫：Acridine red，級別：ACS，規格：30毫升
TAPS,SODIUMSALTTAPS Na生物技術級25G91000-53-2RT
1-苯基-3-甲基-4-苯甲?；?5-吡唑啉酮，英文名或英文縮寫：PMBP，級別：BS，規格：1克
PEPTONE蛋白胨細菌學級100GRT
十二鉬嶙酸，英文名或英文縮寫：Phosphomolybdic acid hydrate，級別：GR，98%，規格：25克
ALKALINEPHOSPHATASEPH9.54L#N/A
石蕊指示劑，英文名或英文縮寫：Litmus，級別：AR，規格：100毫克
M9CAMEDIUMBROTH,POWDERM9CA 培養基肉湯生物技術級100GRT
還原茚三酮二水合物，英文名或英文縮寫：Hydrindantin dihydrate，級別：生物技術級，5/240mg，規格：100毫克
2XYTMEDIUMBROTH2XYT 培養基肉湯生物技術級500GRT
9005-64-5
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