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超級雜交液 B(含甲酰胺)100mL實驗方法

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更新時間:2017-01-17 16:35:47瀏覽次數:237次

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產品簡介

超級雜交液 B(含甲酰胺)100mL實驗方法運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

超級雜交液 B(含甲酰胺)100mL實驗方法產品介紹:

超級雜交液 B(含甲酰胺)100mL實驗方法使用方法: 
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液: 成分 加入的體積 自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶(10 U/μL) 1 μL 滅菌的超純水 補足到 25 μL 注:5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。 8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質時,請在第
8 步之后進行。
磷酸化反應標記:
A. 去磷酸化反應
1. 實驗前需自備的試劑:TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)等 2. 在微量離心管中制備下列反應液: 成分 加入的體積 自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl,pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶 (CIAP,10~20 U/μL)
2 μL 滅菌的超純水 補足到 150 μL
3. 50℃反應 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//(25:24:1),充分混勻。
5. 離心,取上層(水層)移到另一個微量離心管中。
6. 重復操作 4~5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl(zui終濃度 150 mM)。
8. 加入 375 μL(2.5 倍量)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
9. 離心回收沉淀,用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后,沉淀真空干燥。 

10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
磷酸化反應(前反應):
1. 在微量離心管中制備下列反應液:


2. 37℃反應 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標記:
當摻入水平很低的時候,需要使用本步驟,即通過體積排阻色譜或過濾試 劑盒除去未反應的標記。Sephadex G-50 層析柱(需另購)對于去除未摻入 的 dNTPs 效果很好,它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5~10 分鐘以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個 堿基的寡核苷酸。

酵母粉葡萄糖*瓊脂(YDC)250g用于食品中霉菌及酵母菌總數測定(ISO標準)
腸球菌肉湯 250(g) incubation media 腸球菌肉湯 250(g)
普通肉湯瓊脂平板 Nutrient Agar Plate 50塊 一般細菌的培養和細菌總數的測定
酚紅葡萄糖肉湯250用于蠟樣芽孢桿菌葡萄糖分解試驗(SN標準)incubationmedia酚紅葡萄糖肉湯250用于蠟樣芽孢桿菌葡萄糖分解試驗(SN標準)
TIN0Broth
YeastExtractDextroseChloramphenicolAgar
溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養基 250(g) incubation media 溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養基 250(g)
M-H瓊脂平板 M-H Agar Plate 10塊
木糖-明膠培養基250用于蠟樣芽孢桿菌明膠液化試驗incubationmedia木糖-明膠培養基250用于蠟樣芽孢桿菌明膠液化試驗
T1N3肉湯 250g 用于霍亂弧菌的生長試驗(SN標準)
Candida250g用于食品中Candida及酵母菌總數測定
膽汁七葉苷瓊脂(BEA) 100(g) incubation media 膽汁七葉苷瓊脂(BEA) 100(g)
沙保弱氏瓊脂平板 沙保弱氏瓊脂平板 10塊
臘樣芽胞桿菌選擇瓊脂基礎250用于臘樣芽胞桿菌選擇性分離培養incubationmedia臘樣芽胞桿菌選擇瓊脂基礎250用于臘樣芽胞桿菌選擇性分離培養
T1N3Broth
CandidaElectiveAgar
濾膜腸球菌瓊脂 250(g) incubation media 濾膜腸球菌瓊脂 250(g)
克氏鐵瓊脂斜面平板 KIA Plate 10支
葡萄糖酪胨瓊脂250用于食品中臘樣芽胞桿菌鑒定和計數(APHA方法)incubationmedia葡萄糖酪胨瓊脂250用于食品中臘樣芽胞桿菌鑒定和計數(APHA方法)
*葡萄糖斜面瓊脂(AGS) 100 用于霍亂弧菌的復合生化試驗(SN標準)
DTM培養基250g用于食品中真菌的培養
CATC瓊脂 250(g) incubation media CATC瓊脂 250(g)
弧菌選擇瓊脂平板 TCBS Agar Plate 10塊
D-環*0.2加入250mlTSC瓊脂基礎中incubationmediaD-環*0.2加入250mlTSC瓊脂基礎中
ArginineDextroseAgar
DTMMedium
D/E中和瓊脂 250(g) incubation media D/E中和瓊脂 250(g)
* Blood Agar Plate 50塊 營養需求較高的細菌培養
產芽孢肉湯250用于產氣莢膜梭菌的產芽孢培養incubationmedia產芽孢肉湯250用于產氣莢膜梭菌的產芽孢培養
mCPC培養基 250g 用于弧菌分離培養(FDA標準)
DRBC瓊脂250g用于食品中霉菌及酵母菌分離培養
D/E中和肉湯 250(g) incubation media D/E中和肉湯 250(g)
SS瓊脂平板 SS Agar Plate 10塊 沙門菌屬和志賀菌屬細菌的分離培養
*/支*5用水溶解后添加于HB0256中incubationmedia*/支*5用水溶解后添加于HB0256中
mCPCMedium
DRBCAgar
AC肉湯 250(g) incubation media AC肉湯 250(g)
伊紅美蘭瓊脂平板 EMB Agar Plate 10塊 腸道革蘭氏陰性菌的分離培養
多價蛋白胨-酵母膏(PY)培養基250用于產氣莢膜梭菌的培養(SN標準)incubationmedia多價蛋白胨-酵母膏(PY)培養基250用于產氣莢膜梭菌的培養(SN標準)
mCPC培養基添加劑 1ml*5 每瓶添加于100ml mCPC培養基中

C22H23N3O9=473.44 
〖級別〗:AR
靈敏度試驗:合格 
溶解試驗:合格
〖灼燒殘渣〗:≤0.2%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:黃棕色或棕紅色粉末。易溶于水,微溶于乙醇,幾乎不溶于乙迷、丙同和氯方。〖熔點〗220~225℃(分解)。zui大吸收波長 522(450)nm。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)測定水、食物及組織中的鋁。光度測定鋁、鈹和氟化物、鎵、鈧。用于鋁的紙色譜
〖保存〗:RT,避光
玫瑰紅6G
〖英文名稱〗:Rhodamine 6G;Basic Red 1;Rhodamine 590;Rhodamine 6GX;6GDN;Rhodyle 4G;Brilliant pink 5G;Calcozine red 6G extra;C.I. 45160  
〖其他名稱〗:羅丹明6G;羅丹明590;蕊香紅6G;若丹明6G;黃光堿性蕊香紅;堿性紅1;9-[2-(乙氧羰基)苯基]-3,6-二(乙氨基)-2,7-二甲基氯化占噸翁;染料索引45160
〖CAS號〗:989-38-8 
C28H31ClN2O3=479.02
〖級別〗:BS
R


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