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豚鼠肺細胞;GP-F1使用說明書

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所  在  地上海市

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更新時間:2017-02-13 11:10:09瀏覽次數:301次

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產品簡介

豚鼠肺細胞;GP-F1使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

產品名稱豚鼠肺細胞;GP-F1使用說明書
貨期3-5天
發貨地上海

細胞名稱  豚鼠肺細胞;GP-F1使用說明書
形態特性   成纖維細胞樣
生長特性  貼壁生長
特征特性   該細胞系來源于一雄性豚鼠的肺組織。1989年由*昆明細胞庫建立。 
培養條件   M-199: with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS)  15%NBS
傳代方法   1:2傳代;3-4天一次
傳代情況  P2
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  熒光法(-)
STR   -
同工酶  
染色體  
使用權限  A類

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療
氯化硫(二氯化二硫)    Disulfur dichloride    10025-67-9
氯化硫代丁酰* (+4℃)    S-BUTYRYLTHIOCHOLINE CHLORIDE    22026-63-7
氯化鋁溶液(聚合)    Aluminium chloride hexahydrate    7784-13-6
氯化鎂    MagnesiuM Chloride (AS)    7791-18-6
氯化鎂,六水合    NA    
氯化鎂孔雀綠增菌液    Rappaport-Vassiliadis Medium    
氯化鈉蛋白胨緩沖液    NA    
氯化鈉蛋白胨肉湯    Sodium chloride (60g/L) peptone water    
氯化釹    Neodymium(III) chloride hexahydrate    13477-89-9
氯化鉛    Lead dichloride    7758-95-4人白介素1β轉換酶(ICE)免疫試劑盒    Human Interleukin 1β converting enzyme,ICE ELISA Kit
人白介素-1β前體(Pro-IL-1β)免疫試劑盒    Human IL-1β Precursor,Pro-IL-1β ELISA Kit
人白介素1β前體(pro-IL1B)免疫試劑盒    Human pro interleukin 1 beta,pro-IL1B ELISA Kit
人白介素1β(IL-1β)免疫試劑盒    Human Interleukin 1β ELISA Kit
人白介素1α(IL-1α)免疫試劑盒    Human IL-1α ELISA Kit
人白介素19(IL-19)免疫試劑盒    Human IL-19 ELISA Kit
人白介素18結合蛋白(IL-18BP)免疫試劑盒    Human IL-18BP ELISA Kit
人白介素18(IL-18)免疫試劑盒    Human IL-18 ELISA KIT

 

 

 


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