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上海撫生實業有限公司
豚鼠胚胎細胞;104C1使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。
產品名稱 | 豚鼠胚胎細胞;104C1使用說明書 |
貨期 | 3-5天 |
發貨地 | 上海 |
細胞名稱 豚鼠胚胎細胞;104C1使用說明書
形態特性 成纖維細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 104C1細胞初期源于2/N株豚鼠的胎組織,后來細胞群體用苯并芘(Benzopyrene)處理7天誘導細胞產生惡性轉化,連續克隆后獲得傳代細胞系。細胞染色體保留2倍體特征,但接種豚鼠產生實體腫瘤。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 新生牛血清,10%
傳代方法 1:3~1:8
傳代情況 P32
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR
同工酶
染色體
使用權限 A類
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
六氟磷酸苯并三唑-1-氧基三(吡咯烷并)磷 (PyBOP)(2-8℃) Benzotriazole-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate 128625-52-5
六氟磷酸三苯基碳 TRIPHENYLCARBENIUM HEXAFLUOROPHOSPHATE 437-17-2
六甲基二硅氮烷 Hexamethyldisilazane 999-97-3
六甲基二硅基胺基鉀 Potassium bis(trimethylsilyl)amide 40949-94-8
雙(*基硅基)胺鋰 Lithium bis(trimethylsilyl)amide 4039-32-1
六甲基二硅基胺基鈉 Sodium bis(trimethylsilyl)amide 1070-89-9
六甲基磷酰三胺;六磷胺;三(二甲氨基)氧膦 HexaMethylphosphoraMide;HexaMethylphosphoric triaMide;Tris(diMethylaMino)phosphine oxide;HexaMetapol;HeMpa;HMPT;HMPA;ENT-50882; 680-31-9
六氯-1,3-丁二烯 96% Hexachloro-1,3-butadiene 87-68-3
六偏磷酸鈉 Sodium metaphosphate 10124-56-8
六羥基銻酸鉀 POTASSIUM HEXAHYDROXOANTIMONATE 12208-13-8
亞鐵氰化鉀 Potassium ferrocyanide trihyrate 14459-95-1
六亞甲基四胺;海克山明;*;促進劑H;胺仿;四氮六甲環 HexaMethylenetetraMine;Urotropine;Accelerator H;AMinoforM;AMMoforM;MethenaMine;CystaMin;Cystogen;1,3,5,7-TetraazaadaMantane 100-97-0人白介素5受體alpha(IL5RA)免疫試劑盒 Human IL5RA ELISA kit
人白介素5(IL-5)免疫試劑盒 Human IL-5 ELISA KIT
人白介素4受體(IL4R/CD124)免疫試劑盒 Human Interleukin 4 receptor,IL4R/CD124 ELISA Kit
人白介素4(IL-4)免疫試劑盒 Human IL-4 ELISA KIT
人白介素37(IL-37)免疫試劑盒 Human IL-37 ELISA Kit
人白介素35(IL-35)免疫試劑盒 Human Interleukin 35,IL-35 ELISA Kit
人白介素33(IL-33)免疫試劑盒 Human Interleukin 33,IL-33 ELISA Kit
人白介素32(IL-32)免疫試劑盒 Human Interleukin 32,IL-32 ELISA Kit
人白介素31(IL-31)免疫試劑盒 Human IL-31 ELISA Kit
人白介素3(IL-3)免疫試劑盒 Human Interleukin 3 ELISA KIT
人白介素2誘導的T細胞激酶(ITK)免疫試劑盒 Human ITK ELISA kit
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