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小鼠雜交瘤細胞；c7b8F10培養(yǎng)

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更新時間：2017-02-13 15:55:10瀏覽次數(shù)：423次

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產(chǎn)品簡介

小鼠雜交瘤細胞；c7b8F10培養(yǎng)細胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細介紹

產(chǎn)品名稱	小鼠雜交瘤細胞；c7b8F10培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細胞名稱 小鼠雜交瘤細胞；c7b8F10培養(yǎng)
形態(tài)特性   淋巴母細胞樣
生長特性半貼壁生長
特征特性   可產(chǎn)生單克隆抗體。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類

復(fù)蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
兔β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)免疫試劑盒   Rabbit amyloid beta peptide 1-40,Aβ1-40 ELISA Kit
兔S100-A5蛋白(S100A5)免疫試劑盒   Rabbit Protein S100-A5,S100A5 ELISA kit
兔P物質(zhì)受體(SP-R)免疫試劑盒   Rabbit Substance-P receptor,SP-R ELISA kit
兔p物質(zhì)(SP)免疫試劑盒   Rabbit Substance P,SP ELISA Kit
兔p53(p53)免疫試劑盒   Rabbit p53/tumor protein,p53/TP53 ELISA Kit
兔N端前腦鈉素(NT-proBNP)免疫試劑盒   Rabbit N-terminal pro-brain natriuretic,NT-proBNP ELISA kit
兔NADPH氧化酶1()免疫試劑盒   Rabbit NADPH oxidase 1, ELISA kit
兔C肽(C-Peptide)免疫試劑盒   Rabbit C-Peptide ELISA kit
兔CD8分(CD8)免疫試劑盒   Rabbit Cluster of differentiation 8,CD8 ELISA Kit
兔CD4分(CD4)免疫試劑盒   Rabbit Cluster of differentiation 4,CD4 ELISA Kit
兔Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)免疫試劑盒   Rabbit Bcl-2 Assaciated X protein,BAX ELISA Kit
兔ADAM金屬肽酶含血小板反應(yīng)蛋白1型13(ADAMTS13)免疫試劑盒   Rabbit ADAM DAB complete peroxidase substrate system   shēng huà shì jì   容量：   2～8℃   25克
D-2-氨基丁酸   shēng huà shì jì   容量：       100克
D-201高等級大孔強堿Ⅰ型陰離子交換樹脂   shēng huà shì jì   容量：   保存-20℃   1克
D，E中和肉湯   shēng huà shì jì   容量：   RT   250克
D，E中和瓊脂   shēng huà shì jì   容量：   RT   100克
D(-)樟腦磺酸   shēng huà shì jì   容量：       25克
D-(-)水楊苷   shēng huà shì jì   容量：       100克
D(-)酒石酸鈉   shēng huà shì jì   容量：       5克
Con A瓊脂糖凝膠4B   shēng huà shì jì   容量：       500毫克
CO2結(jié)合力測試盒   shēng huà shì jì   容量：   RT   500克