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小鼠雜交瘤細(xì)胞;D11E8A1G5培養(yǎng)

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)代理商

所  在  地上海

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更新時間:2017-02-13 15:55:21瀏覽次數(shù):215次

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產(chǎn)品簡介

小鼠雜交瘤細(xì)胞;D11E8A1G5培養(yǎng)細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基,這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實驗室通常在周一,周三,周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品名稱小鼠雜交瘤細(xì)胞;D11E8A1G5培養(yǎng)
貨期3-5天
發(fā)貨地上海

細(xì)胞名稱  小鼠雜交瘤細(xì)胞;D11E8A1G5培養(yǎng)
形態(tài)特性   淋巴母細(xì)胞樣
生長特性  半貼壁生長
特征特性   可產(chǎn)生單克隆抗體。 
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況  
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陰性
STR  
同工酶  
染色體  
使用權(quán)限  A類

復(fù)蘇操作要點: 
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。 
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療
兔凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX1)免疫試劑盒    Rabbit lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor 1,LOX1 ELISA kit
兔抗腦組織抗體(ABAb)免疫試劑盒    Rabbit anti-brain tissue antibody,ABAb ELISA Kit
兔抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)免疫試劑盒    Rabbit Anti-endothelial cell antibodies,AECA ELISA Kit
兔核因κB受體活化因配基(RANKL)免疫試劑盒    Rabbit receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL ELISA Kit
兔過氧化物酶體增殖因活化受體γ(PPAR-γ)免疫試劑盒    Rabbit Peroxisome Proliferator-activated receptor γ,PPAR-γ ELISA Kit
兔過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARG)免疫試劑盒    Rabbit peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARG ELISA kit
兔過氧化物酶體增殖物激活受體β(PPARβ)免疫試劑盒    Rabbit peroxisome proliferator-activated receptor beta,PPARβ ELISA kit
兔過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARA)免疫試劑盒    Rabbit peroxisome proliferator-activated receptor alpha,PPARA ELISA kitDL-*    shēng huà shì jì    容量:        25克
DL-天冬酰胺一水物    shēng huà shì jì    容量:        100克
DL-天冬氨酸    shēng huà shì jì    容量:    RT    1克
DL-*    shēng huà shì jì    容量:    RT    25克
DL-*甲酯鹽酸鹽    shēng huà shì jì    容量:    2~8°C    5克
DL-*    shēng huà shì jì    容量:        1公斤
DL-賴氨酸鹽酸鹽    shēng huà shì jì    容量:        5克
DL-賴氨酸    shēng huà shì jì    容量:        100克
DL-酒石酸    shēng huà shì jì    容量:    RT    25克
DL-*鹽酸鹽    shēng huà shì jì    容量:        100克
DL-*    shēng huà shì jì    容量:    RT    10克

 

 

 


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