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上海撫生實業有限公司
淋巴母細胞樣培養細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
產品名稱 | 淋巴母細胞樣培養 |
貨期 | 3-5天 |
發貨地 | 上海 |
形態特性 淋巴母細胞樣培養
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細胞屬保藏,其特征特性尚未公開。
培養條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 未定
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
2,4-DCAD 2,4-二氯苯甲醛 500克 特純,98%
1,3-Dimethylurea 二甲基脲 250克 CP,98%
1,3-Dihydroxynaphthalene 1,3-萘二酚 25克 CP,98.5%
1,3-Dihydroxyacetone dimmer 二羥基丙酮 100克 AR,99.5%
1,3-Dibromobenzene 間二溴苯 5克 特純,98.5%
Haptoglobin from pooled human plasma 結合珠蛋白 100克 高純,50u/mg
Gold tribromide 三溴化金 500克 AR,98%
Fmoc-D-Asn-OH N-芴甲氧羰基-D-天冬酰胺 100克 特純,98%
Ammonium metavanadate 釩酸銨 500毫克 AR
2,6-Dimethoxyphenol 焦性兒茶酚-1,3-二甲醚 25克 BR犬高遷移率族蛋白A2(HMGA-2)ELISA Kit ,英文名: Canine high mobility group AT-hook 2,HMGA2 ELISA Kit ,規格: 48T/96T
貓血管內皮細胞生長因子(VEGF)ELISA Kit ,英文名: Cat vascular Endothelial cell Growth Factor,VEGF ELISA Kit ,規格: 48T/96T
貓碳酸酐酶9(CA9)ELISA Kit ,英文名: Cat Carbonic Anhydrase 9,CA9 ELISA Kit ,規格: 48T/96T
貓嗜酸粒細胞趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA Kit ,英文名: Cat Eotaxin 1 ELISA Kit ,規格: 48T/96T
貓生長激素(GH)ELISA Kit ,英文名: Cat growth hormone,GH ELISA Kit ,規格: 48T/96T
貓三碘甲狀腺原氨酸(T3)ELISA Kit ,英文名: Cat Tri-iodothyronine(T3)ELISA Kit ,規格: 48T/96T
貓腦源性神經營養因子(BDNF)ELISA Kit ,英文名: Cat Brain-derived neurotrophic factor,BDNF ELISA kit ,規格: 48T/96T
貓窖蛋白Caveolin-1(CAV1)ELISA Kit ,英文名: Cat Caveolin-1,CAV1 ELISA kit ,規格: 48T/96T
貓甲狀腺素(T4)ELISA Kit ,英文名: Cat thyroxine(T4)ELISA Kit ,規格: 48T/96T
貓甲狀旁腺激素(PTH)ELISA Kit ,英文名: Cat Parathyroid hormone,PTH ELISA Kit ,規格: 48T/96T
貓黃體生成素(LH)ELISA Kit ,英文名: Cat luteinizing hormone,LH ELISA kit ,規格: 48T/96T
貓睪酮(T)ELISA Kit ,英文名: Cat testosterone(T)ELISA kit ,規格: 48T/96T
貓多巴銨(DA)ELISA Kit ,英文名: Cat dopamine,DA ELISA Kit ,規格: 48T/96T
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