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小鼠雜交瘤細胞;HB KC-48培養

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所  在  地上海

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更新時間:2017-02-04 14:25:03瀏覽次數:113次

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產品簡介

小鼠雜交瘤細胞;HB KC-48培養細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

產品名稱小鼠雜交瘤細胞;HB KC-48培養
貨期3-5天
發貨地上海

細胞名稱  小鼠雜交瘤細胞;HB KC-48培養
形態特性   淋巴母細胞樣
生長特性  半貼壁生長
特征特性   該細胞屬保藏,其特征特性尚未公開。 
培養條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況  C6
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陰性
STR  
同工酶  
染色體  
使用權限  未定

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
柚Citrus maxima    Isomeranzin    異橙皮內 酯    1088-17-1    C15H16O4    ≥98%
油橄欖樹 Olea europaea L.    Oleuropein    橄欖苦苷    32619-42-4    C25H32O13    ≥98%
油橄欖樹 Olea europaea L    Hydroxytyrosol    羥基酪醇    10597-60-1    C8H10O3    ≥98%
油橄欖 Olea europaea L.    Protocatechuic acid    原兒茶酸    99-50-3    C7H6O4    ≥98%
油菜花粉Rape flower    22(S),23(S)- Homobrassinolide    蕓苔素內酯    80483-89-2    C29H50O6    ≥98%
蛹蟲草 Cordycepsmilitaris    Cordycepin    蟲草素    73-03-0    C10H13N5O3    ≥98%
印度苦楝樹Azadirachta indica    1,3-Diacetylvilasinin    none    78012-28-9    C30H40O7    ≥95%
印度苦楝樹Azadirachta indica    2',3'-Dehydrosalannol    none    97411-50-2    C32H42O8    ≥95%
印度苦楝樹Azadirachta indica    28-Deoxonimbolide    28-去氧代印苦楝內酯    126005-94-5    C27H32O6    ≥98%
印度苦楝樹Azadirachta indica    Deacetylnimbin    脫乙酰基印楝素    18609-16-0    C28H34O8    ≥96%
印度苦楝樹Azadirachta indica    Deacetylnimbinene    脫乙?;¢叵?nbsp;   78916-55-9    C26H32O6    ≥98%DHX    丙酮酸脫氫酶復合物X蛋白抗體
PCK1    磷酸烯醇丙酮酸羧激酶抗體
PFKFB1    果糖-2,6-二磷酸酶1抗體
phospho-PFKL (Ser775)    磷酸化6磷酸果糖激酶抗體
P21    p21蛋白抗體
CD162    P選擇素糖蛋白配體1抗體
PRSS2    *蛋白酶2抗體
PSMD10    蛋白酶調解因子10抗體
PGGT1B    香葉烯基轉移酶1β抗體

 

 


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