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上海撫生實業有限公司
小鼠抗人IgE雜交瘤細胞;mAbhIgE-499使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 小鼠抗人IgE雜交瘤細胞;mAbhIgE-499使用說明書
形態特性 淋巴母細胞樣
生長特性 半貼壁生長
特征特性
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 保持細胞密度在1×105~1×106 cells/ml之間,每周換液2~3次
傳代情況
凍存條件 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權限 A類
產品名稱 | 小鼠抗人IgE雜交瘤細胞;mAbhIgE-499使用說明書 |
貨期 | 3-5天 |
發貨地 | 上海 |
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
RMD2 微管動力調節蛋白2抗體
FAM151A FAM151A蛋白抗體
FAM156A 跨膜蛋白29抗體
FAM154A FAM154A蛋白抗體
FAM155A FAM155A蛋白抗體
FAM164B FAM164B蛋白抗體
FRMD3 FRMD3蛋白抗體
FRMD4B FRMD4B蛋白抗體
FRMD7 FRMD7蛋白抗體
FRMD4A FRMD4A蛋白抗體
FAHD2A 延胡索酰乙酰乙酸水解酶抗體
FAM101A FAM101A蛋白抗體
FAM102B FAM102B蛋白抗體
FAM104B FAM104B蛋白抗體
FAM107A 腎細胞癌下調蛋白1抗體SSDC Medium
改良克氏雙糖鐵培養基 250g 生化培養基,用于小腸結腸炎耶爾森氏菌的生化反應篩選
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