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雜交瘤(B類);Z153A2A5B3A12使用說明書

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所  在  地上海市

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更新時間:2017-01-24 10:23:31瀏覽次數:145次

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產品簡介

雜交瘤(B類);Z153A2A5B3A12使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療

細胞名稱  雜交瘤(B類);Z153A2A5B3A12使用說明書
形態特性   淋巴母細胞樣
生長特性  半貼壁生長
特征特性   可產生單克隆抗體;凍存前做支原體去除 
培養條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   保持細胞密度在1×105~1×106 cells/ml之間,每周換液2~3次
傳代情況  
凍存條件   基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測  培養法(-)
STR   -
同工酶  
染色體  
使用權限  A類

產品名稱雜交瘤(B類);Z153A2A5B3A12使用說明書
貨期3-5天
發貨地上海

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
DEFEMP2    纖連蛋白4抗體
EFTUD2    延伸因子結合蛋白EFTUD2抗體
EGFL6    表皮生長因子樣蛋白6抗體
ENPP6    磷酸酶/磷酸二酯酶家族成員6抗體
ENT1    核苷轉運蛋白ENT1抗體
ENT2    核苷轉運蛋白ENT2抗體
Epac2    *核苷酸交換因子4
phospho-EPB41 (Tyr418 + Tyr660)    磷酸化紅細胞膜條帶4.1蛋白抗體
phospho-EphB1 (Tyr928)    磷酸化*蛋白激酶受體B1抗體
EphB1+EphB2    蛋白激酶受體B1+B2抗體
phospho-Ephexin-1 (Tyr179)    磷酸化神經細胞鳥苷酸置換因子Ephexin1抗體
phospho-Ephrin B(Ser287)    磷酸化Ephrin B抗體
EPLIN    惡腫瘤丟失蛋白EPLIN抗體
phospho-EPO Receptor (Tyr368)    磷酸化紅細胞生成素受體抗體
Phospho-HER2 (Tyr1139)    磷酸化HER2受體抗體
Phospho-HER2 (Tyr1221)    磷酸化HER2受體抗體EM培養基    250g    用于致病性大腸桿菌的增菌培養和腸桿菌的增菌培養
EEM medium        
胰蛋白胨膽鹽瓊脂    250g    用于大腸桿菌的膜過濾法選擇性培養(ISO標準)
Tryptone Bile Agar        
Elek氏培養基    250g    用于致瀉大腸埃希氏菌的產毒培養
Elek Medium        
TTC溶液(0.125%)    2ml*5    添加于HB0127中
TTC Solution(0.125%)        
Tergitol-7瓊脂    250g    用于大腸菌群的鑒定(NMKL)
Tergitol-7 Agar        
H7.3PBS緩沖液    250g    PBS是Tris-HCl緩沖鹽溶液
PBS        
MEE肉湯    250g    用于腸道菌的選擇性增菌培養(SN標準)
MEE Broth        
m-遠藤氏培養基    250g    用于濾膜法檢測水中大腸菌群
M-Endo Medium        

 

 

 


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