雜交瘤（B類）；IB3C10H12A12G2H8F3使用說明書

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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

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產(chǎn)品簡介

雜交瘤（B類）；IB3C10H12A12G2H8F3使用說明書細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

產(chǎn)品名稱	雜交瘤（B類）；IB3C10H12A12G2H8F3使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱 雜交瘤（B類）；IB3C10H12A12G2H8F3使用說明書
形態(tài)特性   淋巴母細(xì)胞樣
生長特性半貼壁生長
特征特性   可產(chǎn)生單克隆抗體；凍存前做支原體去除
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   保持細(xì)胞密度在1×105～1×106 cells/ml之間，每周換液2～3次
傳代情況
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR   -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
Digoxin   抗體
Dishevelled 2   蓬亂蛋白2抗體
phospho-Dishevelled 2 (Thr224)   磷酸化蓬亂蛋白2抗體
DR1 protein   轉(zhuǎn)錄下調(diào)蛋白1抗體
DHRS2   脫氫酶/還原酶家族成員2抗體
DSPP   牙本質(zhì)磷蛋白抗體
Dermokine beta   Dermokine β蛋白抗體
DPCR1   DPCR1蛋白抗體
DERP6   表皮源蛋白6抗體
DUSP7   雙特異蛋白磷酸酶7抗體
DUSP26   雙特異蛋白磷酸酶26抗體（絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶8）
DAO1   阿米洛利結(jié)合蛋白1抗體
DBF4A   S期激酶活化蛋白DBF4A抗體
DSN1   著絲粒相關(guān)蛋白DSN1抗體
DCDC2   雙皮層蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白DCDC2抗體CVT瓊脂   250g   用于乳制品中嗜冷菌的計(jì)數(shù)
Nutrient Agar
平板計(jì)數(shù)肉湯（PCB）   250g   用于濾膜法計(jì)數(shù)菌落總數(shù)
大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基
乳糖復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)基   250g   用于大腸菌群,糞大腸菌群,大腸桿菌的測(cè)定(GB標(biāo)準(zhǔn))
Lactose Broth
去氧膽酸鹽瓊脂（DC）   250g   用于大腸菌群固體平板測(cè)定
Desoxycholate Lactose Agar
MR-VP培養(yǎng)基   250g   用于大腸桿菌的甲基紅和VP試驗(yàn)(SN標(biāo)準(zhǔn))
Methyl Red Voges Proskauer Broth
西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂   250g   用于腸道菌的檸檬酸鹽利用試驗(yàn)(GB標(biāo)準(zhǔn))
Simmons Citrate Agar
腸道菌計(jì)數(shù)瓊脂（VRBDA）   250g   用于腸道菌計(jì)數(shù)和腸桿菌科鑒別
Violet Red Bile Dextrose Agar
LB肉湯   250g   用于分子生物學(xué)中大腸桿菌的培養(yǎng)
LB Broth

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