小鼠Lewis肺癌瘤株；LLT使用說明書

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更新時間：2017-01-24 10:15:07瀏覽次數(shù)：381次

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產(chǎn)品簡介

小鼠Lewis肺癌瘤株；LLT使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細介紹

產(chǎn)品名稱	小鼠Lewis肺癌瘤株；LLT使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細胞名稱 小鼠Lewis肺癌瘤株；LLT使用說明書
形態(tài)特性   實體瘤
生長特性體內(nèi)生長
特征特性   C57BL小鼠體內(nèi)移植，*成瘤。
培養(yǎng)條件    -
傳代方法   制備成細胞懸液接種至C57BL小鼠。
傳代情況不詳
凍存條件   基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測培養(yǎng)法（-）
STR   -
同工酶
染色體   -
使用權限 A類

復蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
Destrin   肌動蛋白解聚因子抗體
DGAT2   甘油二酯酰基轉(zhuǎn)移酶2抗體
DHX15   DHX15蛋白抗體
DIAPH2   DIAPH2蛋白抗體
phospho-Dishevelled 2 (Ser143)   磷酸化蓬亂蛋白2抗體
DKK2   Wnt通路抑制因子2抗體
phospho-DAPP1 (Tyr139)   磷酸化B淋巴細胞銜接分子DAPP1抗體
phospho-DAXX (Ser668)   磷酸化Fas相關死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體
DBPA   冷休克蛋白DBPA抗體
DCP1A   脫帽酶1A抗體
DCPS   清道夫脫帽酶/熱休克蛋白1抗體
DEF6/IBP   干擾素調(diào)節(jié)因子4結(jié)合蛋白抗體
DCLREC1C   DNA交聯(lián)修復蛋白1C抗體
phospho-DAP Kinase 2 (Ser318)   磷酸化凋亡相關蛋白激酶2抗體三糖鐵（TSI）瓊脂   250g   生化培養(yǎng)基，用于腸桿菌科細菌的生化反應篩選（GB標準）
TSI Agar
*麥康凱瓊脂添加劑   1ml*5   每200mlHB0121培養(yǎng)基中添加1支（含*0.01mg和亞碲酸鉀0.5mg）
Sorbitol MacConkey Agar Additives
月桂基硫酸鹽胰蛋白胨MUG培養(yǎng)基   250g   用于O157菌檢測，不含MUG（SN標準）
LST-MUG
4-甲基傘形酮-D-葡萄糖醛酸苷(MUG)   0.1g   0.01g添加于100mlHB0146（LST-MUG）中，用于O157鑒定
MUG
*麥康凱瓊脂基礎（SMAC）   250g   用于大腸桿菌O157的分離培養(yǎng)
Sorbitol Maconkey Agar Base
改良麥康凱肉湯（CT-MAC）   250g   用于O157選擇性增菌培養(yǎng)
Modified MacConkey Broth
改良麥康凱肉湯添加劑   1ml*5支   每支添加于200mlHB8659中