【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 小鼠胚胎成纖維細胞（HNP抗性）；HNP MEF(CF-1)培養
形態特性 成纖維樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 具有HNP抗性
培養條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 3～4天傳代一次
傳代情況 P5
凍存條件 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法（-）
STR -
同工酶
染色體
使用權限 A類
小鼠胚胎成纖維細胞（HNP抗性）；HNP MEF(CF-1)培養復蘇操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
小鼠胚胎成纖維細胞（HNP抗性）；HNP MEF(CF-1)培養操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
DPY19L1 短粗矮胖19蛋白樣1抗體
DGKE 二酰基甘油激酶5抗體
DNA PKcs DNA依賴蛋白激酶催化亞基抗體
DUX4 雙同源框蛋白4抗體
DAZ1 無精癥缺失基因1抗體
Phospho-CHK2 (ser516) 磷酸化細胞周期檢測點激酶2抗體
Kv2.1 鉀通道蛋白DRK1抗體
DRG1 GTP發育調控結合蛋白1抗體
DAL1 細胞骨架4.1蛋白家族DAL1抗體
DRAK2 DAP凋亡誘導蛋白激酶2抗體
DAB2 信號轉導功能磷蛋白DAB2抗體
DACH1 細胞命運決定因子DACH1抗體
DAB2IP Dab2相互作用蛋白抗體
DECR1 線粒體2,4-雙烯酰*還原酶1抗體EC Broth
Lauryl Sulfate Tryptose Broth
10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯 9ml*20支/包 用于*的MPN測定及增菌培養
10% NaCl Trypticase Soy Broth
10%氯化鈉胰蛋白胨大豆肉湯 10ml*20支/包 用于*的MPN測定及增菌培養
10% NaCl Trypticase Soy Broth
李氏菌增菌肉湯（LB2） 9ml*20支/包 用于李氏菌二步增菌
Listeria Enrichment Broth Base
李氏菌增菌肉湯（LB1） 9ml*20支/包 用于李氏菌二步增菌
小鼠胚胎成纖維細胞（HNP抗性）；HNP MEF(CF-1)培養Listeria Enrichment Broth Base
胰酪胨大豆多粘菌素肉湯 10ml/支*20 用于蠟樣芽孢桿菌的MPN值測定
Trypticase-Soy-Polymyxin Broth Base
LST發酵管（含小導管） 10ml*20支/包 每管10ml
大腸桿菌O157檢驗培養基
