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小鼠原B細胞株;BaF3使用說明書

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)代理商

所  在  地上海市

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更新時間:2017-01-24 09:07:50瀏覽次數(shù):294次

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產(chǎn)品簡介

小鼠原B細胞株;BaF3使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一,周三,周五更換培養(yǎng)基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療

產(chǎn)品名稱小鼠原B細胞株;BaF3使用說明書
貨期3-5天
發(fā)貨地上海

細胞名稱  小鼠原B細胞株;BaF3使用說明書
形態(tài)特性   圓形
生長特性  懸浮生長
特征特性   生物法檢測生長因子活性。 
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS;IL-3
傳代方法   1:3傳代;3~4天1次。
傳代情況  C5
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  培養(yǎng)法(-)
STR   -
同工酶  
染色體   58~64
使用權(quán)限  A類

復(fù)蘇操作要點: 
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
C4orf46    4號染色體開放閱讀框46抗體
C4orf51    4號染色體開放閱讀框51抗體
GBE1    分支酶GBE1抗體
phospho-Cofilin (Ser24)    磷酸化絲切蛋白抗體
C5R1    補體成分5受體1抗體
CDC2L6    細胞分裂周期2樣蛋白激酶6抗體
C3IP1     補體C3IP1抗體
Phospho-CHK2 (Thr68)    磷酸化細胞周期檢測點激酶2抗體
CDK11    周期素依賴激酶11抗體
CDK10    周期素依賴激酶10
C8orf86    8號染色體開放閱讀框86抗體
phospho-Cdc25B (Ser323)    磷酸化細胞分裂周期蛋白25B抗體
phospho-Cdc25B (Ser186)    磷酸化細胞分裂周期蛋白25B抗體
phospho-Caspase 6 (Ser257)    磷酸化半胱胺酸蛋白酶蛋白6抗體L-0035    BIU-87(人膀胱癌細胞)    5×106cells/瓶×2
CL-0036    BRL-3A(大鼠正常肝細胞)    5×106cells/瓶×2
CL-0037    BNL CL.2(小鼠胚胎肝細胞)    5×106cells/瓶×2
CL-0038    BRL(大鼠肝細胞)    5×106cells/瓶×2
CL-0039    BSC-1(猴腎細胞)    5×106cells/瓶×2
CL-0040    BT-474(人導(dǎo)管癌細胞)    5×106cells/瓶×2
CL-0055    Caov-3(人乳突狀卵巢腺癌細胞)    5×106cells/瓶×2
CL-0056    CCD-1095Sk(人浸潤性導(dǎo)管癌旁皮膚細胞)    5×106cells/瓶×2
CL-0057    CCL-149(大鼠肺泡上皮細胞)    5×106cells/瓶×2
CL-0058    CCRF-CEM(人急性淋巴白血病細胞)    5×106cells/瓶×2
CL-0059    CFPAC-1(人胰腺癌細胞)    5×106cells/瓶×2
CL-0060    CHL(倉鼠肺細胞)    5×106cells/瓶×2
CL-0061    CHO(倉鼠卵巢細胞)    5×106cells/瓶×2
CL-0062    CHO-K1(倉鼠卵巢細胞亞株)    5×106cells/瓶×2

 

 


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