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小鼠成肌細胞;C2C12使用說明書

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所  在  地上海市

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更新時間:2017-01-24 09:03:41瀏覽次數:203次

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產品簡介

小鼠成肌細胞;C2C12使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

產品名稱小鼠成肌細胞;C2C12使用說明書
貨期3-5天
發貨地上海

細胞名稱  小鼠成肌細胞;C2C12使用說明書
形態特性   成纖維細胞樣;梭形
生長特性  貼壁生長
特征特性   該細胞株是Yaffe D, Saxel O建立的小鼠成肌細胞系的亞株。該細胞分化較快,可形成能收縮的微管,產生特異的肌肉蛋白。在骨形態形成蛋白(BMP-2)的作用下,該細胞可由成肌細胞分化為成骨細胞。檢測發現該細胞鼠痘病毒陰性。 
培養條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  20%FBS;4mM glutamine
傳代方法   維持細胞濃度在1.5~10×105 viable cells/75 cm2;2~3天換液1次。
傳代情況  C5
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  培養法(-)
STR   -
同工酶  
染色體   69~77
使用權限  A類

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療
6ORF173    6號染色體開放閱讀框173抗體
C6ORF182    6號染色體開放閱讀框182抗體
C6orf186     6號染色體開放閱讀框186抗體
C6orf191    6號染色體開放閱讀框191抗體
C6orf195     6號染色體開放閱讀框195抗體
C6ORF199    6號染色體開放閱讀框199抗體
C7orf34    7號染色體開放閱讀框34抗體
C6orf201    6號染色體開放閱讀框201抗體
C6orf203     6號染色體開放閱讀框203抗體
C6orf204     6號染色體開放閱讀框204抗體
C6orf206    6號染色體開放閱讀框206抗體
C6orf211    6號染色體開放閱讀框211抗體
C6orf225    6號染色體開放閱讀框225抗體
C6orf25    6號染色體開放閱讀框25抗體T-103B     I型膠原酶(含100mL酶解緩沖液)    10mL
T-104A    II型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)    1mL
T-104B    II型膠原酶(含100mL酶解緩沖液)    10mL
T-105A    III型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)    1mL
T-105B    III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液)    10mL
T-106A    IV型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)    1mL
T-106B    IV型膠原酶(含100mL酶解緩沖液)    10mL
CL-0002    5637(人膀胱癌細胞)    5×106cells/瓶×2
CL-0003    293A (人胚腎細胞)    5×106cells/瓶×2
CL-0004    22RV1(人前列腺癌細胞)    5×106cells/瓶×2
CL-0005    293T(人胚腎細胞)    5×106cells/瓶×2
CL-0006    3T3-L1(小鼠胚胎成纖維細胞)    5×106cells/瓶×2

 

 


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