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小鼠骨髓瘤細胞;Sp2/0-Ag14使用說明書

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更新時間:2017-01-24 08:58:22瀏覽次數:1362次

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產品簡介

小鼠骨髓瘤細胞;Sp2/0-Ag14使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療

細胞名稱  小鼠骨髓瘤細胞;Sp2/0-Ag14使用說明書
形態特性   淋巴母細胞樣;圓形
生長特性  懸浮生長
特征特性   該細胞是由綿羊紅細胞免疫的BALB/c小鼠脾細胞和P3X63Ag8骨髓瘤細胞融合得到的。該細胞不分泌免疫球蛋白,對20 μg/ml的8-氮*有抗性,對HAT比較敏感;該細胞可以作為細胞融合時的B細胞組分用于制備雜交瘤;鼠痘病毒陰性。 
培養條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代;3~4天1次。
傳代情況  C5
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  培養法(-)
STR   -
同工酶  
染色體   45~80
使用權限  A類

產品名稱小鼠骨髓瘤細胞;Sp2/0-Ag14使用說明書
貨期3-5天
發貨地上海

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
Phospho-CHK2 (Thr383)    磷酸化細胞周期檢測點激酶2抗體
CHM    遺傳脈絡膜缺乏癥相關蛋白抗體
CELSR1    鈣粘蛋白超家族CELSR1抗體
CEMP1    牙骨質蛋白1抗體
CENPBD1    CENPBD1蛋白抗體
CENPI    著絲粒蛋白I抗體
CENPJ    著絲粒蛋白J抗體
CENPL    著絲粒蛋白L抗體
CENPM    著絲粒蛋白M抗體
CENPN    著絲粒蛋白N抗體
CENPQ    著絲粒蛋白Q抗體
Centaurin beta 2    CENTB2蛋白抗體
CENPQ    著絲粒蛋白Q抗體
Centaurin alpha 2    CENTA2蛋白抗體
CENTB1    胞吞再循環相關銜接蛋白CENTB1抗體
phospho-CENTB1 (Ser554)    磷酸化胞吞再循環相關銜接蛋白CENTB1抗體CM-M051    小鼠子宮頸上皮細胞*培養基    100mL
CM-M052    小鼠子宮平滑肌細胞*培養基    100mL
CM-M053    小鼠卵巢上皮細胞*培養基    100mL
CM-M054    小鼠子宮成纖維細胞*培養基    100mL
CM-M055    小鼠卵巢成纖維細胞*培養基    100mL
CM-M056    小鼠腎實質細胞*培養基    100mL
CM-M057    小鼠腎系膜細胞*培養基    100mL
CM-M058    小鼠膀胱上皮細胞*培養基    100mL
CM-M088    小鼠破骨細胞*培養基    100mL
CM-M089    小鼠皮膚肥大細胞*培養基    100mL
CM-M090    小鼠前脂肪細胞*培養基    100mL
CM-M091    小鼠成骨細胞*培養基    100mL
CM-M092    小鼠關節軟骨細胞*培養基    100mL
CM-M093    小鼠胎兒真皮成纖維細胞*培養基    100mL

 

 


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