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技術文章

elisa檢測試劑盒試驗步驟

閱讀:293發布時間:2017-11-8

elisa檢測試劑盒試驗步驟:
1)將兩種顯色底物1:1等體積混合(一般各1ml/membrane)。
2)將混合物覆蓋在膜表面,1-2分鐘,搖晃使均勻。
3)用保鮮膜把膜包起來,放入夾板中。
4)在暗室中將X光片,覆蓋在膜的上面,夾好夾子,曝光1min。
5)顯影、定影。
6)根據結果調整曝光時間和曝光區域,得到結果。
注意:熒光在一段時間后會越來越弱。ELISA試劑盒
記得全程手套操作,一則避免手印污染影響結果,二則保護自己(未交聯的丙烯酰胺、甲醛等等雖不立即致命但都會慢慢毒害你的身體)
1.   如果WB前沒有可參考的資料--比如不知道是否有表達,比如抗體少還要摸條件(稀釋度),可以用剪膜剩下的邊角料來先做幾組點雜交摸條件,省點時間省點試劑;
2.  去掉積層膠后,預染的Marker可用以識別膠上下方向和膜的正反面(預染Marker如果照著說明書用量,有可能在電泳時看不到條帶,但轉膜時有濃縮效應而且背景白就可以看到了。如果要電泳能看到就要參考電泳的那個用量,或者多加1-2倍的量);如果目標蛋白小,指示劑也可以指示方向,但是如果蛋白大,指示劑已經跑出去了,就要留意分清膠上下方向,切個小角是常用的方法。膜和濾紙一起裁(不過濾紙上下疊多了膜不好剪,硝纖膜容易裂,用利刀+尺子+墊厚報紙劃比較容易)盡量和膠一樣大小,膠用純水沖洗一下后用電泳緩沖液平衡過再量。我自己通常剪的時候會故意長寬各比膠少1mm,保證膜和膠不會碰到對方背后的濾紙就好。
3.  對于特別小的蛋白,tricine SDS-PAGE電泳有助于提高蛋白大小在1KD-20KD間的分辨率,不用*,丙烯酰胺的濃度也不用太高(可參考2004年中國生物工程雜志上有一篇文章(有效分離1kD小肽的Tricine-SDS-PAGE方法)
4.  轉膜前膠要在轉移緩沖液里平衡一下防止膠變形,也有助于進一步去掉可能有礙轉膜的雜質。還有人在這一步浸泡幫助蛋白復性,可以直接在膠上檢測蛋白活性。、
elisa檢測試劑盒人轉化生長因子β3(TGF-β3)免疫試劑盒    Human Transforming Growth factor β3,TGF-β3 ELISA kit
人轉化生長因子β2(TGFβ2)免疫試劑盒    Human TGF β2 ELISA Kit
人轉化生長因子β1(TGF-β1)免疫試劑盒    Human TGF-β1 ELISA kit
人轉化生長因子α(TGF-α)免疫試劑盒    Human TGF-α ELISA Kit
人轉*酶2C多肽(TGM2)免疫試劑盒    human transglutaminase 2C polypeptide,TGM2 ELISA Kit
人主要組織相容性復合體,II類,DQα2(HLA-DQA2)免疫試劑盒    Human HLA-DQA2 ELISA Kit
人周期素依賴性激酶5(CDK5)免疫試劑盒    Human Cyclin Dependent Kinase 5,CDK5 ELISA Kit
人周期素依賴性激酶4(CDK-4)免疫試劑盒    Human Cyclin-dependent kinase 4,CDK-4 ELISA Kit
人腫瘤相關抗原(TAA)免疫試劑盒    Human tumor-associated antigen,TAA ELISA Kit
人腫瘤特異生長因子/腫瘤相關因子(TSGF)免疫試劑盒    Human Tumor Specific Growth Facter/tumor supplied group of factor,TSGF ELISA Kit
人腫瘤壞死因子誘導基因6蛋白(TNFAIP6)免疫試劑盒    Human TNFAIP6 ELISA Kit
人腫瘤壞死因子相關激活誘導因子(TRANCE)免疫試劑盒    Human TNF related activation induced cytokine,TRANCE ELISA Kit
人腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體受體3(TRAIL-R3)免疫試劑盒    Human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand receptor 3,TRAIL-R3 ELISA Kit
人腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體受體2(TRAIL-R2/DR5)免疫試劑盒    Human TRAIL-R2 ELISA Kit
人腫瘤壞死因子受體相關因子6(TRAF6)免疫試劑盒    Human tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6 ELISA kit
人腫瘤壞死因子受體相關因子1(TRAF1)免疫試劑盒    Human tumor necrosis factor-associated factor 1,TRAF1 ELISA kit
人腫瘤壞死因子受體超家族成員18(TNFRSF18)免疫試劑盒    Human TNFRSF18 ELISA KIT
人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)免疫試劑盒    Human TNFsR-ⅠELISA KIT
人腫瘤壞死因子超家族15(TL1A/TNFSF15)免疫試劑盒    Human tumor necrosis factor superfamily 15,TL1A/TNFSF15 ELISA Kit
人腫瘤壞死因子γ(TNFγ)免疫試劑盒    Human Tumor Necrosis Factor γ,TNFγ ELISA Kit
人腫瘤壞死因子β(TNF-β)免疫試劑盒    Human TNF-β ELISA KIT
人腫瘤壞死因子α轉化酶(TACE)免疫試劑盒    Human TNF α converting enzyme,TACE ELISA Kit
人腫瘤壞死因子α(TNF-α)抗體免疫試劑盒    Human Tumor necrosis factor α(TNF-α)antibody ELISA kit
人腫瘤壞死因子α(TNF-α)免疫試劑盒    Human TNF-α ELISA KIT
人腫瘤關聯鈣信號轉導因子2(TACSTD2)免疫試劑盒    Human TACSTD2 ELISA Kitelisa檢測試劑盒

 


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