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分子生物學服務

閱讀:490發布時間:2016-7-19

分子生物學服務

 

一、DNA抽提及純化

根據客戶要求,利用試劑盒,對動物(組織、細胞、血液等)、植物(各種組織)、微生物、病毒等進行DNA抽提及純化。

 

提供結果:DNA、電泳圖、OD值及定量結果(濃度及體積)。

 

二、RNA抽提及純化

根據客戶要求,利用試劑盒或自產試劑盒(主要針對特殊組織,如含次生代謝產物豐富的植物組織等),對動物(組織、細胞、血液等)、植物(各種組織)、微生物、病毒等進行RNA抽提及純化。

 

提供結果:RNA、電泳圖、OD值及定量結果(濃度及體積)。

 

三、mRNA分離及純化

根據客戶要求,利用Qiagen公司分離純化試劑盒或國產分離純化試劑盒,對總RNA進行mRNA的分離及純化,以獲得高質量的mRNA用于后續的建庫等工作。

 

提供結果:mRNA、電泳圖及定量結果(濃度及體積)。

 

四、PCR及純化

根據客戶要求,利用客戶提供的樣品及引物,進行批量PCR并進行產物純化,包括前期的轉化、鋪板、挑菌、搖菌等工作,可提供全程服務。純化建議采用millipore公司純化板。

 

提供結果:PCR產物、電泳圖及定量結果(濃度及體積)。

 

五、質粒抽提

根據客戶要求,利用進口或國產試劑盒,對客戶提供樣品進行質粒小抽或大抽。為客戶提供內毒素含量達到科研級和醫藥級的質粒DNA。

 

提供結果:質粒、實驗報告(包括質粒電泳照片、鑒定結果及OD值測定結果)、1.7≤OD260/OD280≤2.0的質粒。

 

六、RT-PCR檢測

RT-PCR是以RNA為起始材料經逆轉錄反應產生cDNA,再以cDNA為模板進行PCR擴增以獲取目的基因,用于檢測細胞或組織中基因表達變化。

 

實驗流程:包括RNA制備、RT反應、PCR反應等。

 

引物要求:由服務方設計并合成。如果客戶提供,需提供引物序列;引物若為干粉,請提供引物的準確量;若為稀釋液,請提供引物的zui終濃度(每個反應所需的引物滿足以下要求:濃度≥10pm/μl,體積≥10μl)。

 

結果報告內容:電泳圖譜及相關說明;實驗流程。

 

七、載體構建

載體構建是將目的基因與載體連接并轉化得到重組質粒的過程,客戶需提供來源可靠的組織,細胞或血液以便用于目的基因的擴增。

 

1、原核表達載體的構建、誘導表達和蛋白純化

 

實驗過程:RNA抽提、RT-PCR、連接、轉化、挑選陽性克隆、測序、誘導表達、蛋白純化

 

提供結果:

 

(1)、提供測序報告*1份

 

(2)、PCR擴增電泳圖片*1份

 

(3)、重組質粒菌種或者質粒(30ul)*1份

 

(4)、純化后蛋白

 

(5)、實驗報告*1份

 

2、真核表達載體的構建

 

實驗過程:RNA抽提、RT-PCR、連接、轉化、挑選陽性克隆、測序

 

提供結果:

 

(1)、提供測序報告*1份

 

(2)、PCR擴增電泳圖片*1份

 

(3)、重組質粒菌種或者質粒(30ul)*1份

 

(4)、實驗報告*1份

 

3、腺病毒載體構建及病毒包裝服務

 

* 目的基因克隆載體的構建

 

實驗過程:RNA抽提、RT-PCR、連接、轉化、挑選陽性克隆、測序

 

提供結果:

 

(1)、提供測序報告*1份

 

(2)、PCR擴增電泳圖片*1份

 

(3)、重組質粒菌種或者質粒(30ul)*1份

 

(4)、實驗報告*1份

 

* 目的基因表達載體構建

 

實驗過程:酶切,連接,轉化,挑選陽性克隆,PCR鑒定,酶切鑒定

 

提供結果:

 

(1)、PCR鑒定圖片*1份

 

(2)、酶切鑒定圖片*1份

 

(3)、實驗報告*1份

 

* 包裝腺病毒

 

實驗過程:酶切,共轉染細胞,細胞培養,鑒定,純化,測定濃度

 

提供結果:

 

(1)、實驗報告*1份

 

(2)、轉染后圖片*1份

 

(3)、包裝好的病毒*1份(滴度>5*107)

 

4、慢病毒載體構建及病毒包裝服務

 

* 目的基因克隆載體的構建

 

實驗過程:RNA抽提、RT-PCR、連接、轉化、挑選陽性克隆、測序

 

提供結果:

 

(1)、提供測序報告*1份

 

(2)、PCR擴增電泳圖片*1份

 

(3)、重組質粒菌種或者質粒(30ul)*1份

 

(4)、實驗報告*1份

 

* 目的基因表達載體構建

 

實驗過程:酶切,連接,轉化,挑選陽性克隆,PCR鑒定,酶切鑒定

 

提供結果:

 

(1)、PCR鑒定圖片*1份

 

(2)、酶切鑒定圖片*1份

 

(3)、實驗報告*1份

 

* 包裝慢病毒

 

實驗過程:酶切,共轉染細胞,細胞培養,鑒定,純化,測定濃度

 

提供結果:

 

(1)、實驗報告*1份

 

(2)、轉染后圖片*1份

 

(3)、包裝好的病毒*1份(檢測滴度)

 

八、RNA干擾服務

近年來研究表明,將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞,可以使mRNA發生特異性降解,導致其相應基因的沉默。

 

這種轉錄后基因沉默的機制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被稱為RNA干擾(RNAi):

 

1、siRNA的設計及合成,由客戶自行設計,或由公司代為設計目前已證實的siRNA,以及陰性對照,并由DNA合成儀合成

 

2、構建RNAi干擾載體,PCR及測序鑒定

 

3、PCR檢測mRNA表達以及western blotting檢測蛋白的表達

 

提供結果:

 

1、PCR鑒定圖片*1份

 

2、提供測序報告*1份

 

3、酶切鑒定圖片*1份

 

4、RT-PCR電泳圖*1份

 

5、western blotting結果*1份

 

6、實驗報告*1份


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