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上海瑞齊生命科學有限公司
閱讀:490發布時間:2016-7-19
分子生物學服務
一、DNA抽提及純化
根據客戶要求,利用試劑盒,對動物(組織、細胞、血液等)、植物(各種組織)、微生物、病毒等進行DNA抽提及純化。
提供結果:DNA、電泳圖、OD值及定量結果(濃度及體積)。
二、RNA抽提及純化
根據客戶要求,利用試劑盒或自產試劑盒(主要針對特殊組織,如含次生代謝產物豐富的植物組織等),對動物(組織、細胞、血液等)、植物(各種組織)、微生物、病毒等進行RNA抽提及純化。
提供結果:RNA、電泳圖、OD值及定量結果(濃度及體積)。
三、mRNA分離及純化
根據客戶要求,利用Qiagen公司分離純化試劑盒或國產分離純化試劑盒,對總RNA進行mRNA的分離及純化,以獲得高質量的mRNA用于后續的建庫等工作。
提供結果:mRNA、電泳圖及定量結果(濃度及體積)。
四、PCR及純化
根據客戶要求,利用客戶提供的樣品及引物,進行批量PCR并進行產物純化,包括前期的轉化、鋪板、挑菌、搖菌等工作,可提供全程服務。純化建議采用millipore公司純化板。
提供結果:PCR產物、電泳圖及定量結果(濃度及體積)。
五、質粒抽提
根據客戶要求,利用進口或國產試劑盒,對客戶提供樣品進行質粒小抽或大抽。為客戶提供內毒素含量達到科研級和醫藥級的質粒DNA。
提供結果:質粒、實驗報告(包括質粒電泳照片、鑒定結果及OD值測定結果)、1.7≤OD260/OD280≤2.0的質粒。
六、RT-PCR檢測
RT-PCR是以RNA為起始材料經逆轉錄反應產生cDNA,再以cDNA為模板進行PCR擴增以獲取目的基因,用于檢測細胞或組織中基因表達變化。
實驗流程:包括RNA制備、RT反應、PCR反應等。
引物要求:由服務方設計并合成。如果客戶提供,需提供引物序列;引物若為干粉,請提供引物的準確量;若為稀釋液,請提供引物的zui終濃度(每個反應所需的引物滿足以下要求:濃度≥10pm/μl,體積≥10μl)。
結果報告內容:電泳圖譜及相關說明;實驗流程。
七、載體構建
載體構建是將目的基因與載體連接并轉化得到重組質粒的過程,客戶需提供來源可靠的組織,細胞或血液以便用于目的基因的擴增。
1、原核表達載體的構建、誘導表達和蛋白純化
實驗過程:RNA抽提、RT-PCR、連接、轉化、挑選陽性克隆、測序、誘導表達、蛋白純化
提供結果:
(1)、提供測序報告*1份
(2)、PCR擴增電泳圖片*1份
(3)、重組質粒菌種或者質粒(30ul)*1份
(4)、純化后蛋白
(5)、實驗報告*1份
2、真核表達載體的構建
實驗過程:RNA抽提、RT-PCR、連接、轉化、挑選陽性克隆、測序
提供結果:
(1)、提供測序報告*1份
(2)、PCR擴增電泳圖片*1份
(3)、重組質粒菌種或者質粒(30ul)*1份
(4)、實驗報告*1份
3、腺病毒載體構建及病毒包裝服務
* 目的基因克隆載體的構建
實驗過程:RNA抽提、RT-PCR、連接、轉化、挑選陽性克隆、測序
提供結果:
(1)、提供測序報告*1份
(2)、PCR擴增電泳圖片*1份
(3)、重組質粒菌種或者質粒(30ul)*1份
(4)、實驗報告*1份
* 目的基因表達載體構建
實驗過程:酶切,連接,轉化,挑選陽性克隆,PCR鑒定,酶切鑒定
提供結果:
(1)、PCR鑒定圖片*1份
(2)、酶切鑒定圖片*1份
(3)、實驗報告*1份
* 包裝腺病毒
實驗過程:酶切,共轉染細胞,細胞培養,鑒定,純化,測定濃度
提供結果:
(1)、實驗報告*1份
(2)、轉染后圖片*1份
(3)、包裝好的病毒*1份(滴度>5*107)
4、慢病毒載體構建及病毒包裝服務
* 目的基因克隆載體的構建
實驗過程:RNA抽提、RT-PCR、連接、轉化、挑選陽性克隆、測序
提供結果:
(1)、提供測序報告*1份
(2)、PCR擴增電泳圖片*1份
(3)、重組質粒菌種或者質粒(30ul)*1份
(4)、實驗報告*1份
* 目的基因表達載體構建
實驗過程:酶切,連接,轉化,挑選陽性克隆,PCR鑒定,酶切鑒定
提供結果:
(1)、PCR鑒定圖片*1份
(2)、酶切鑒定圖片*1份
(3)、實驗報告*1份
* 包裝慢病毒
實驗過程:酶切,共轉染細胞,細胞培養,鑒定,純化,測定濃度
提供結果:
(1)、實驗報告*1份
(2)、轉染后圖片*1份
(3)、包裝好的病毒*1份(檢測滴度)
八、RNA干擾服務
近年來研究表明,將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞,可以使mRNA發生特異性降解,導致其相應基因的沉默。
這種轉錄后基因沉默的機制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被稱為RNA干擾(RNAi):
1、siRNA的設計及合成,由客戶自行設計,或由公司代為設計目前已證實的siRNA,以及陰性對照,并由DNA合成儀合成
2、構建RNAi干擾載體,PCR及測序鑒定
3、PCR檢測mRNA表達以及western blotting檢測蛋白的表達
提供結果:
1、PCR鑒定圖片*1份
2、提供測序報告*1份
3、酶切鑒定圖片*1份
4、RT-PCR電泳圖*1份
5、western blotting結果*1份
6、實驗報告*1份
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