磺胺甲惡唑檢測試劑盒注意事項
1 使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。
2 不要使用過期試劑盒。
3 試劑盒使用前，將試劑恢復至室溫（25±2℃），建議至少回溫2小時。
4 標準品中含有三聚氰胺，使用時應特別注意，操作時應帶手套。
5 終止液中含有硫酸，使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。
6 不同標準品、樣品所用吸頭不能混用，否則會影響試驗結果。
7 不同批號試劑盒中的試劑不得混用；不同標準品、樣品所用吸頭不得混用，否則會影響
磺胺甲惡唑檢測試劑盒用戶自備試劑：
1． 10mM TBS（pH7.2~7.4）
三羥基氨基甲烷 1.21g
氯化鈉 7.6g
加蒸餾水 800mL，濃鹽酸調 pH 值至 7.2~7.4，后定容至 1000mL
TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%體積比）
2．抗原修復液（依檢測抗原不同而選擇不同的修復液）
10mM pH6.0 檸檬酸緩沖液
檸檬酸 0.38g
檸檬酸三鈉 2.45g
加蒸餾水 900mL，濃鹽酸調 pH 值至 6.0，后定容至 1000mL或：0.5M EDTA 修復液（pH8.0）
EDTA·2H2O 186.1g
檸檬酸三鈉 2.45g加蒸餾水 700mL，用 10mM NaOH 調 pH 值至 8.0，后定容至 1000Ml
3. 緩沖甘油封固劑 10 mL
4. Tween 20 5 mL石蠟包埋組織切片免疫染色
實驗步驟（建議方案 ）：
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
磺胺甲惡唑檢測試劑盒試劑盒所含試劑：
試劑 A 磺胺甲惡唑檢測試劑盒透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（選用）
試劑 B 封閉緩沖液（封閉用） 20 mL
試劑 C （*分裝）已稀釋的即用型 ABCG2 一抗（2.5ml）
試劑 D （*分裝）*化羊抗兔 IgG 1 支（濃度 1.5 mg/mL，稀釋比為 1:300~1:500）50 μL+抗體稀釋液 20ml
試劑 E HRP-SA 復合物 1 支（濃度 1 μM，稀釋比 1:50~1:200）100 μL
試劑 F DAB 顯色液 5ml
1.烤片： 將待做切片置于切片架上，于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr；
2.脫蠟： 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；
3.水化： 切片經下行酒精水化，無水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85%乙醇 2min；75%乙醇 2min，自來水沖洗，ddH2O 洗 2×2min；
4.抗原修復： 根據抗體說明書*方法進行抗原修復，常采用高壓、微波（溫度達到98~100℃）或酶消化修復法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O 洗 2×2min，TBS 洗滌（2×2min）（體修復方法見附 1）* 注：有些抗原勿需修復，
5 步封閉。5.封閉： 滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 30 min；
6.加一抗：滴加用試劑 C（即用型一抗），37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜；
7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
8.封閉： 滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 10 min；
9.加二抗： 滴加用抗體稀釋液稀釋的*化二抗（試劑 D），37℃濕盒中孵育30 min；
10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
11.封閉： 滴加試劑 Tween 20，37℃濕盒孵育封閉 20 min；
12.加 HRP-SA： 滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑 E（1：50~200，終濃度 5~20 nM），37℃濕盒中孵育 30 min；
13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）；
14.顯色：應用 DAB 溶液（試劑 F）顯色；
15.復染：自來水充分沖洗，復染，脫水，透明；
16.封片： 待組織標本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；
17.觀察成像： 顯微鏡下觀察成像。
