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干細胞端粒酶檢測

閱讀:932發布時間:2015-7-30

ELISA試劑盒間充質干細胞主要來源于骨髓、脂肪和臍帶等組織。Zuk等從人抽脂術中抽取的脂肪組織懸液中分離出多潛能細胞。人脂肪源間充質干細胞和骨髓源間充質干細胞一樣具有分化為脂肪、骨、軟骨、骨骼肌、肝、心肌和神經等細胞的潛能。脂肪間充質干細胞表面分子及特征與其他組織來源的間充質干細胞相似。Kern等報道,與骨髓來源的間充質干細胞相比,脂肪來源間充質干細胞具有更長的培養期以及更高的增殖能力。由于脂肪來源的間充質干細胞相對于骨髓而言更容易獲得,使得其成為間充質干細胞基礎與臨床研究方面的熱

1 材料和方法
設計:細胞學體外觀察。
    ELISA試劑盒    時間及地點:于2009-08在中國醫學*血液學研究所泰達生命科學技術研究中心完成。
        材料:**脂肪組織來源于天津怡麗醫學美容整形門診接受抽脂術的5例健康供者,對治療及實驗均簽署知情同意書。Hela細胞由中國醫學*基礎醫學研究所基礎醫學細胞中心提供。
實驗方法:
        人脂肪間充質干細胞的分離培養:分別從每例抽脂健康供者抽取20 mL脂肪組織,先用 0.075%的膠原酶消化30 min,消化后的混合液經200目濾網過濾后接種于細胞培養瓶中,加入含體積分數為10%胎牛血清的DF12培養基,于37 ℃、體積分數為5%的CO2培養箱中培養,待細胞生長至80%融合時,*消化細胞,按1∶3傳代。
        Hela細胞的培養:取Hela細胞,加入含體積分數為10%胎牛血清的1640培養基。于37 ℃、體積分數為5%的CO2培養箱中培養,待細胞生長至80%融合時,*消化細胞,按1∶3傳代。脂肪間充質干細胞的流式表型檢測:脂肪間充質干細胞經CD19-FITC , CD34-FITC , CD11b-PE,CD73-PE,CD90-PE,CD45-PE, CD105-PE,HLA-DR-PE標記后,流式細胞分析儀進行分析。

ELISA試劑盒        脂肪間充質干細胞的誘導分化:復蘇細胞后,以2×105/孔的密度接種于24孔板中,待細胞達到70%融和后,更換為分化誘導培養基。成骨分化誘導培養基:體積分數為10%的胎牛血清、0.1 μmol/L*、0.2 mmol/L抗壞血酸磷酸鹽、10 mmol/L β-甘油磷酸。成脂分化誘導培養基:體積分數為10%的胎牛血清、 1 μmol/L*、0.5 mmol/L IBMX、10 mg/L 胰島素、100 μmol/L*。每兩三天更換培養基,21 d后對成脂誘導的脂肪源間充質干細胞進行油紅O染色,對成骨誘導的脂肪源間充質干細胞作Von Kossa染色。

 ELISA試劑盒       實驗細胞的cDNA制備:*消化、收集人脂肪間充質干細胞和Hela細胞,按RNA提取試劑盒說明書所提供的操作程序提取RNA,并對所得到的RNA進行反轉錄。反轉錄反應體系為20 μL,其中5×反轉錄緩沖液4 μL,RNAsin 1 μL,10 mmol/L dNTP 2 μL,DTT 1 μL, Oligo(dT) 1 μL,細胞總RNA 5 μg,M-MLV(反轉錄酶) 1 μL(200 U),用RNase-free水補充至 20 μL。反應條件為42 ℃水浴1 h,然后70 ℃ 水浴10 min以滅活反轉錄酶,獲得所需cDNA。用RT-PCR檢測脂肪間充質干細胞端粒酶基因的表達:根據GeneBank里端粒酶的mRNA序列設計引物,Forward primer:5’-GGG TGG CAC GGC TTT TGT TCA GAT-3’,Reverse primer:5’-TCA GCC GCA AGA CCC CAA AGA GTT-3’ 。

熊果苷 76
熊果苷 
雄諾龍、雙氫睪酮 
鋅成分分析標準物質(G02702
鋅成分分析標準物質(G02701
鋅成分分析標準物質(G0270 
鋅白銅成分分析標準物質(15-20鋅白銅(G02104
辛硫磷農藥標準物質 
辛硫磷甲醇溶液標準物質061405
硝基苯系列混標/甲醇溶液標準物質 
蝦青素(需干冰運輸01600A
蝦青素 
錫精礦成分分析標準物質(G072 2
錫精礦成分分析標準物質(G072 1
錫基合金成分分析標準物質(G02 02
錫基合金成分分析標準物質(G02 01
稀土鎂合金成分分析標準物質(G02 51
烯唑醇農藥純度標準物質Diniconazole060885
烯丙基異硫氰酸酯016081
烯丙基硫酸鹽016061
烯丙基甲基硫酸鹽016071
烯丙基二硫化物016051
戊唑醇農藥純度標準物質060882
五氯苯/異辛烷溶液標準物質 
*(DL-α-生育酚(090400401
*2(E0900000
*1鹽酸鹽 標準品(C17455000
脫氧*內酯 
土壤中7種PCBs(高含量標準物質(3714
土壤中7種PCBs(低含量標準物質(3715
土壤有效態成分分析標準物質--棕壤(G07412(ASA-1
土壤有效態成分分析標準物質--紫色土(G07414(ASA- 
土壤有效態成分分析標準物質--水稻土*(G07415(ASA-4
土壤有效態成分分析標準物質--紅壤(G07416(ASA-5
土壤有效態成分分析標準物質-赤紅壤(G07417(ASA-6
土壤有效態成分分析標準物質--潮土(G0741 (ASA--2


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