D-纖維二糖特殊培養(yǎng)法
二倍體細胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關(guān)鍵在于傳代，其傳代程序為：
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以僅覆蓋細胞層即可；作用1~5分鐘。
4.待細胞附著松動、細胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。
5.輕輕反復(fù)吹打制成單個細胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細胞(Feeder Cells)。制備方法：
1.取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細胞，90%匯合時制成細胞懸液，再按105細胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細胞半?yún)R合時，準(zhǔn)備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜；或用射線單次照射，劑量30～50戈瑞。
3.細胞經(jīng)上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時，*消化細胞制成懸液，按5×104（104細胞/cm2）接種入新D-纖維二糖中。
4.48小時后，即可用于細胞克隆之用。
D-纖維二糖細胞分離（克?。┡囵B(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細胞克隆法：
1.消化：取健康待克隆細胞，吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液，加消化液。
2.低密度細胞懸液的制備：做克隆細胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細胞懸液，然后稀釋細胞，使之成為1~2細胞/毫升懸液，zui適宜細胞密度為1~2細胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種：先用吸管輕輕吹打細胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準(zhǔn)確，爭取在zui短時間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標(biāo)記：培養(yǎng)6~12小時后，待細胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺上，觀察和標(biāo)記下含有單個細胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液，只有在細胞增長過于緩慢時才可進行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過多，余少許，以免細胞干涸。然后再迅速補加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細胞增至500~600個時，可進行分離培養(yǎng)。
5.分離擴大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時后進行觀察。挑選生長良好的單細胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細胞群即可，如過多，應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細胞變圓時，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當(dāng)細胞離開底物懸浮后，一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿中，再補加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細胞群后，即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
D-纖維二糖相關(guān)產(chǎn)品如下：hz-1234 WISH(羊膜細胞)
hz-1235 HL-7702(肝細胞)
hz-1236 Ha Fe(羊膜細胞)
hz-1237 QSG-7701(肝細胞)
hz-1238 HFL-I(MEMα)(胚肺成纖維細胞)
hz-1239 HeLa [ Chang Liver ](張氏肝細胞)
hz-1240 V79-4(中國倉鼠肺細胞)
hz-1241 CHL/IU [ CHL-11 ](中國倉鼠肺細胞)
hz-1242 CHO(中國倉鼠卵巢細胞)
hz-1243 BHK(幼倉鼠腎細胞)
hz-1244 R 1610(中國倉鼠體細胞)
hz-1245 BRL 3A(大鼠肝細胞)
hz-1246 NRK(大鼠腎細胞)
hz-1247 L929(成纖維細胞)
hz-1248 Y1(腎上腺皮質(zhì)細胞)
hz-1249 CTLL-2(T細胞)
hz-1250 BALB/3T3(BALB/C小鼠胚成纖維細胞)
hz-1251 Ana-1(巨噬細胞)
hz-1252 SRSV/3T3(SRSV轉(zhuǎn)化的3T3細胞)
hz-1253 3T6-Swiss albino(胚胎成纖維細胞)
hz-1254 PA317(成纖維細胞)
hz-1255 3T3-Swiss albino(胚胎成纖維細胞)
hz-1256 Mo-MuLv/3T3(Mo-MuLv感染的3T3細胞)
hz-1257 MRC-5(胚肺細胞)
hz-1258 WI-38(胚肺細胞)
hz-1259 FRhK-4(恒河猴胚腎細胞)
hz-1260 VERO C1008 (E6)(非洲綠猴腎細胞)
hz-1261 Pt K1 (NBL-3)(長鼻袋鼠腎細胞)
hz-1262 L1210(白血病細胞)
hz-1263 Neuro-2A(腦神經(jīng)瘤細胞)
