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上海滬震實(shí)業(yè)有限公司
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更新時間:2018-03-04 17:30:09瀏覽次數(shù):211次
聯(lián)系我時,請告知來自 智慧城市網(wǎng)YPD 瓊脂
是一種能夠自動誘導(dǎo)由乳糖操縱子調(diào)控的目的蛋白質(zhì)表達(dá)的培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基有利于大腸桿菌的高水平生長,且無需監(jiān)測細(xì)胞生長狀態(tài)、無需加入誘導(dǎo)物(如IPTG)即可高水平自動誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白。現(xiàn)貨供應(yīng)。咨詢!
YPD 瓊脂特殊培養(yǎng)法
二倍體細(xì)胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同,關(guān)鍵在于傳代,其傳代程序?yàn)椋?/span>
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化,加入消化液量以僅覆蓋細(xì)胞層即可;作用1~5分鐘。
4.待細(xì)胞附著松動、細(xì)胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大,便終止消化。為防止細(xì)胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液(新舊培養(yǎng)液按2:1新舊混合)。
5.輕輕反復(fù)吹打制成單個細(xì)胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細(xì)胞(Feeder Cells)。制備方法:
1.取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細(xì)胞,90%匯合時制成細(xì)胞懸液,再按105細(xì)胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細(xì)胞半?yún)R合時,準(zhǔn)備0.25μg/ml的絲裂霉素C,按2μg/106細(xì)胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜;或用射線單次照射,劑量30~50戈瑞。
3.細(xì)胞經(jīng)上述處理后,Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時,*消化細(xì)胞制成懸液,按5×104(104細(xì)胞/cm2)接種入新YPD 瓊脂中。
4.48小時后,即可用于細(xì)胞克隆之用。
YPD 瓊脂細(xì)胞分離(克隆)培養(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細(xì)胞克隆法:
1.消化:取健康待克隆細(xì)胞,吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液,加消化液。
2.低密度細(xì)胞懸液的制備:做克隆細(xì)胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細(xì)胞懸液,然后稀釋細(xì)胞,使之成為1~2細(xì)胞/毫升懸液,zui適宜細(xì)胞密度為1~2細(xì)胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種:先用吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液,使混懸均勻,繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準(zhǔn)確,爭取在zui短時間內(nèi)加完,以免培養(yǎng)液蒸發(fā),然后迅速蓋好蓋板,置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標(biāo)記:培養(yǎng)6~12小時后,待細(xì)胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后,從溫箱中取出,置倒置光顯微鏡臺上,觀察和標(biāo)記下含有單個細(xì)胞的孔,置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液,只有在細(xì)胞增長過于緩慢時才可進(jìn)行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基,但不要吸除過多,余少許,以免細(xì)胞干涸。然后再迅速補(bǔ)加新鮮克隆培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細(xì)胞增至500~600個時,可進(jìn)行分離培養(yǎng)。
5.分離擴(kuò)大培養(yǎng):培養(yǎng)86~96小時后進(jìn)行觀察。挑選生長良好的單細(xì)胞克隆孔,先吸除舊培養(yǎng)液,用Hanks洗1~2次,繼加*少許,加入量已能覆蓋細(xì)胞群即可,如過多,應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視,待發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓時,加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基,用吸管輕輕吹打,當(dāng)細(xì)胞離開底物懸浮后,一并吸入管內(nèi),移入另瓶或皿中,再補(bǔ)加一定量克隆培養(yǎng)液,置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖,使之形成新的細(xì)胞群后,即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
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P815 小鼠肥大細(xì)胞
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SMC 兔主動脈平滑肌細(xì)胞
Vero 猴腎細(xì)胞
WEHI-3 小鼠血液細(xì)胞
Y2 小鼠成纖維細(xì)胞
L6 大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞
NRK 小鼠結(jié)締組織細(xì)胞
AtT-20 小鼠垂體瘤
BC3H1, 鼠腦瘤
BV-2 小鼠小膠質(zhì)瘤細(xì)胞
C6 大鼠腦膠質(zhì)瘤
Cyc-tAg 小鼠T淋巴細(xì)胞瘤(SV40T抗原轉(zhuǎn)染)
EL-4 鼠T淋巴細(xì)胞瘤
FOX-NY 小鼠淋巴瘤細(xì)胞
GH3 大鼠垂體瘤細(xì)胞
GT1.1 小鼠垂體瘤細(xì)胞(分泌促生長激素分泌激素)
HEPA1-6 小鼠肝癌細(xì)胞
MEL 小鼠紅白血病細(xì)胞
MFC 小鼠前胃癌細(xì)胞
MMQ 大鼠垂體瘤細(xì)胞
NG108-15 小鼠神經(jīng)細(xì)胞瘤/大鼠神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤雜交瘤細(xì)胞
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Yac-1 小鼠淋巴瘤細(xì)胞
H-4-II-E 大鼠肝細(xì)胞瘤
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