酵母浸膏葡萄糖*瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)特殊培養(yǎng)法
二倍體細(xì)胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關(guān)鍵在于傳代，其傳代程序?yàn)椋?/span>
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以僅覆蓋細(xì)胞層即可；作用1~5分鐘。
4.待細(xì)胞附著松動(dòng)、細(xì)胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細(xì)胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。
5.輕輕反復(fù)吹打制成單個(gè)細(xì)胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細(xì)胞(Feeder Cells)。制備方法：
1.取原代培養(yǎng)的人或動(dòng)物胚胎成纖維細(xì)胞，90%匯合時(shí)制成細(xì)胞懸液，再按105細(xì)胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細(xì)胞半?yún)R合時(shí)，準(zhǔn)備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細(xì)胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過(guò)夜；或用射線單次照射，劑量30～50戈瑞。
3.細(xì)胞經(jīng)上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時(shí)，*消化細(xì)胞制成懸液，按5×104（104細(xì)胞/cm2）接種入新酵母浸膏葡萄糖*瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)中。
4.48小時(shí)后，即可用于細(xì)胞克隆之用。
細(xì)胞分離（克隆）培養(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細(xì)胞克隆法：
1.消化：取健康待克隆細(xì)胞，吸出瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液，加消化液。
2.低密度細(xì)胞懸液的制備：做克隆細(xì)胞時(shí)首先需先用消化法制備出分散成單個(gè)細(xì)胞懸液，然后稀釋細(xì)胞，使之成為1~2細(xì)胞/毫升懸液，zui適宜細(xì)胞密度為1~2細(xì)胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種：先用吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時(shí)要迅速準(zhǔn)確，爭(zhēng)取在zui短時(shí)間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標(biāo)記：培養(yǎng)6~12小時(shí)后，待細(xì)胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺(tái)上，觀察和標(biāo)記下含有單個(gè)細(xì)胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無(wú)需換液，只有在細(xì)胞增長(zhǎng)過(guò)于緩慢時(shí)才可進(jìn)行換液。換液時(shí)先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過(guò)多，余少許，以免細(xì)胞干涸。然后再迅速補(bǔ)加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細(xì)胞增至500~600個(gè)時(shí)，可進(jìn)行分離培養(yǎng)。
5.分離擴(kuò)大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時(shí)后進(jìn)行觀察。挑選生長(zhǎng)良好的單細(xì)胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細(xì)胞群即可，如過(guò)多，應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓時(shí)，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當(dāng)細(xì)胞離開(kāi)底物懸浮后，一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿中，再補(bǔ)加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細(xì)胞群后，即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
相關(guān)產(chǎn)品如下：hz-5803 NCI-H1299（人肺癌細(xì)胞）
hz-1721 PC-12（大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤）
hz-1651 COS-7（非洲青猴腎細(xì)胞）
hz-11731 TOV-112D（人上皮性卵巢癌細(xì)胞）
hz-171 MRC-5(人正常胚肺成纖維細(xì)胞）
hz-5875 NCI-H1563 [H1563]（人胚肺細(xì)胞）
hz-5928 NCI-H2170 [H2170]（人肺鱗狀細(xì)胞癌）
hz-211 Hs888Lu（人肺成纖維細(xì)胞）
hz-2177 SW 1271 [SW-1271; SW1271]（人肺腺癌細(xì)胞）
hz-8065 Hep G2（人肝癌細(xì)胞）
hz-2061 SJCRH30 [RC13; RMS 13; SJRH30]（人骨髓橫紋肌肉癌細(xì)胞）
hz-1772 C2C12（人肌肉成纖維細(xì)胞瘤）
hz-1447 G-7（小鼠骨骼肌肌肉母瘤細(xì)胞）
hz-2174 Sol8（小鼠骨骼肌肌肉母細(xì)胞）
hz-198 BLO-11（小鼠骨骼成纖維細(xì)胞）
hz-197 NOR-10（小鼠骨骼肌成纖維細(xì)胞）
hz-178 NCI-H596 [H596]（人肺癌細(xì)胞）
hz-182 NCI-H520 [H520]（人肺癌細(xì)胞）
hz-5889 NCI-H1703 [H1703]（人肺癌細(xì)胞）
hz-5826 NCI-H226 [H226]（人肺癌細(xì)胞）
hz-58 SK-MES-1（人肺癌細(xì)胞）
hz-5900 NCI-H1869 [H1869]（人肺癌細(xì)胞）
hz-59 SW 900 [SW-900; SW900]（人肺癌細(xì)胞）
hz-12557 7F2（小鼠雜交瘤細(xì)胞）
hz-173 3T3-L1（小鼠脂肪細(xì)胞）
hz-11233 THLE-3（人肝上皮細(xì)胞）
hz-12284 PT67（小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞）
hz-11372 hFOB 1.19（人SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞）
hz-1777 HIT-T15（倉(cāng)鼠beta胰島細(xì)胞）
hz-11506 Beta-TC-6（小鼠胰腺癌beta細(xì)胞）
hz-1550 Ca Ski（人小腸頸部表皮樣癌細(xì)胞）
hz-2196 GC-2spd(ts)（小鼠精母細(xì)胞）
hz-249 NCL-H548（人胰腺癌細(xì)胞）
hz-138 Hs 683（人腦視神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞）
會(huì)員1.png)
