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底層培養(yǎng)基(Ames 試驗(yàn))

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更新時(shí)間:2018-02-11 15:52:32瀏覽次數(shù):324次

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經(jīng)營(yíng)模式:生產(chǎn)廠家

商鋪產(chǎn)品:9991條

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底層培養(yǎng)基(Ames 試驗(yàn))
是一種能夠自動(dòng)誘導(dǎo)由乳糖操縱子調(diào)控的目的蛋白質(zhì)表達(dá)的培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基有利于大腸桿菌的高水平生長(zhǎng),且無(wú)需監(jiān)測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)、無(wú)需加入誘導(dǎo)物(如IPTG)即可高水平自動(dòng)誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白。現(xiàn)貨供應(yīng)。咨詢!

詳細(xì)介紹

基礎(chǔ)底層培養(yǎng)基(Ames 試驗(yàn))

絕大多數(shù)培養(yǎng)基是建立在*(BSS)基礎(chǔ)上,添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。zui廣泛應(yīng)用的培養(yǎng)基是Eearle`s MEM 的混合物,其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。而Ham`s F12 也包括非必須氨基酸,維生素的范圍亦很廣,另外常規(guī)含有無(wú)機(jī)鹽和代謝添加劑(例如核苷酸)。MEM/F12 這兩種培養(yǎng)基各取1/2,形成神經(jīng)生物學(xué)zui通用的培養(yǎng)基。Dulbecco`s改良培養(yǎng)基——DMEM,現(xiàn)應(yīng)用于快速生長(zhǎng)的細(xì)胞,同MEM含有相同的營(yíng)養(yǎng)成分,但濃度高出2~4倍。選擇某種培養(yǎng)基,應(yīng)仔細(xì)了解成分表,應(yīng)知道大多數(shù)情形下培養(yǎng)基都有不足。例如,有些培養(yǎng)基在氨基酸中包括有*,而這種培養(yǎng)基雖廣泛用于神經(jīng)生物學(xué)領(lǐng)域,但它對(duì)某些對(duì)*敏感的可能有細(xì)胞外毒性損傷的神經(jīng)元而言,則并非*選擇,特別是如果神經(jīng)元生長(zhǎng)在缺乏膠質(zhì)的環(huán)境中時(shí)。F12中含有*,據(jù)報(bào)道也有神經(jīng)毒效應(yīng)。

底層培養(yǎng)基(Ames 試驗(yàn)) 制備方法:

1. 培養(yǎng)同源細(xì)胞(未克隆前時(shí)的同一細(xì)胞)至半?yún)R合狀態(tài)時(shí),更換一次培養(yǎng)液,再繼續(xù)培養(yǎng)24~48小時(shí)后,吸出所有培養(yǎng)液。

2. 離心:3000~4000/分離心10分鐘,吸取上清液。

3. 濾過(guò):再經(jīng)直徑0.22μm濾孔的濾膜過(guò)濾,低溫凍存貯備用;用時(shí)取1分適應(yīng)培養(yǎng)基+2培養(yǎng)基混合使用。

生長(zhǎng)因子絕大多數(shù)哺乳類胚胎神經(jīng)元有嚴(yán)格的營(yíng)養(yǎng)要求,若不能提供適宜的生長(zhǎng)因子或合適的因子組分,將會(huì)使絕大多數(shù)神經(jīng)元在體外培養(yǎng)的數(shù)天中死亡。解決這一問(wèn)題有兩條思路,一是讓培養(yǎng)細(xì)胞提供自己的營(yíng)養(yǎng)因子,二是在底層培養(yǎng)基(Ames 試驗(yàn)) 中加入純的生長(zhǎng)因子。如果細(xì)胞混合物能在高密度時(shí)生長(zhǎng),所需的生長(zhǎng)因子便會(huì)積累到可觀的數(shù)值,尤其當(dāng)培養(yǎng)基很少變化時(shí)。若某種細(xì)胞混合物生長(zhǎng)時(shí)有很少的營(yíng)養(yǎng)需求,可保持培養(yǎng)基在一段時(shí)間里不作任何變動(dòng),以使?fàn)I養(yǎng)(生長(zhǎng))因子積累,而zui后促使所需要的細(xì)胞類型能夠生長(zhǎng)。但是,這種對(duì)營(yíng)養(yǎng)(生長(zhǎng))因子自身倚賴性亦有弊端,因?yàn)橥ǔT诨旌霞?xì)胞群體中細(xì)胞很難有同比例增殖,某些細(xì)胞會(huì)因生長(zhǎng)條件的貧乏而受限制。另外,這種方法只能進(jìn)行相當(dāng)高密度的細(xì)胞培養(yǎng)。因?yàn)榕囵B(yǎng)基的條件在細(xì)胞的較低密度時(shí)變的不夠有效。不過(guò)某些時(shí)候純化神經(jīng)元群體的低密度培養(yǎng)可用條件培養(yǎng)基(經(jīng)過(guò)了高密度培養(yǎng))進(jìn)行,或在膠質(zhì)上生長(zhǎng)的神經(jīng)元所用過(guò)的培養(yǎng)基來(lái)支持。

滿足神經(jīng)元營(yíng)養(yǎng)需求的第二條途徑是向培養(yǎng)基中加入生長(zhǎng)因子。通常用于組培的通用適宜因子是神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF。不過(guò),只有少數(shù)對(duì)這種蛋白質(zhì)有反應(yīng)的細(xì)胞類型的細(xì)胞才能生長(zhǎng)。

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