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上海滬震實(shí)業(yè)有限公司
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更新時(shí)間:2018-01-24 00:21:56瀏覽次數(shù):351次
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肝癌細(xì)胞,BEL-7405細(xì)胞
是成體干細(xì)胞的一種我公司經(jīng)營細(xì)胞以及各類生化試劑、試劑盒、細(xì)胞、分子生物學(xué)、血清、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品、培養(yǎng)基等品種齊全,價(jià)格實(shí)惠,質(zhì)量佳,如有需求請或在線客服!
檢測原理肝癌細(xì)胞,BEL-7405細(xì)胞
細(xì)胞發(fā)生凋亡或壞死,其細(xì)胞DNA均發(fā)生斷裂,細(xì)胞內(nèi)小分子量DNA斷增加,高分子DNA減少,胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)DNA斷。但凋亡細(xì)胞DNA斷裂點(diǎn)均有規(guī)律的發(fā)生在核小體之間,出現(xiàn)180-200bpDNA斷,而壞死細(xì)胞的DNA斷裂點(diǎn)為無特征的雜亂片斷,利用此特征可以確定群體細(xì)胞的死亡,并可與壞死細(xì)胞區(qū)別,細(xì)胞繁殖以分裂方式進(jìn)行。細(xì)胞作為一個(gè)獨(dú)立生命單位,既有生長繁殖,也有衰老死亡。細(xì)胞衰老是生物有機(jī)體衰老的基礎(chǔ)。在多細(xì)胞生物的個(gè)體發(fā)育過程中,細(xì)胞常常分化成各種構(gòu)造和功能不同的細(xì)胞,如肌細(xì)胞、紅細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞等都屬于高度分化的細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生癌變時(shí),細(xì)胞便喪失其原來正常的功能,并無休止地分裂,形成腫瘤。
肝癌細(xì)胞,BEL-7405細(xì)胞操作方法
固定 | 培養(yǎng)細(xì)胞的制片或冰凍切片用4%多聚甲醛固定30min(4℃)后,用80%酒精再固定2h(-20℃)。常規(guī)4%中性福爾馬林固定、石蠟包埋之切片進(jìn)行脫蠟、水化。 |
洗滌 | 玻片浸入PBS緩沖液,搖床上洗滌5min,三次。 |
反應(yīng) | 洗滌后的玻片用吸水紙吸干細(xì)胞或組織周圍水分,按50μl/cm2滴加反應(yīng)液(每50μL反應(yīng)液含TdT酶0.5μL,標(biāo)記的-dUTP 1μL),使反應(yīng)液均勻地覆蓋于所有細(xì)胞或組織切片上,蓋上塑料蓋玻片,置濕盒中,37℃孵育1h。 |
終止反應(yīng) | 去掉塑料蓋玻片,將玻片置盛有洗滌緩沖液的染色缸內(nèi),洗滌兩次,每次5min。 |
FITC標(biāo)記 | 洗滌后的玻片用吸水紙吸去細(xì)胞或組織周圍水分,按50μl/cm2滴加FITC反應(yīng)液(含FITC 2.5μg/mL),室溫下避光孵育10min。 |
洗滌 | 將玻片置于洗滌緩沖液內(nèi),洗兩次,每次5min。 |
PI復(fù)染 | 將玻片置于盛有PI染液的染色缸內(nèi),室溫下避光染色30min。 |
封片 | 用蓋玻片直接蓋在含PI染液的玻片上,亦可用無色指甲油涂于蓋玻片四周邊緣,置暗盒中,盡早鏡檢觀察。 |
交貨時(shí)間 | 15~20天 |
肝癌細(xì)胞,BEL-7405細(xì)胞傳代:
1.培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時(shí)要傳代。
2.把原有培養(yǎng)基吸掉。
3.加適當(dāng)?shù)?(能覆蓋細(xì)胞就行),消化1-2分鐘。
4.細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
5.用移液槍吹打細(xì)胞,把細(xì)胞都懸浮起來。
6.把細(xì)胞吸到15ml的離心管中,1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
7.倒掉上清液,加1-2ml培養(yǎng)基,把細(xì)胞都吹起來。
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