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堿性磷酸酶抗體

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更新時(shí)間:2018-03-09 16:21:38瀏覽次數(shù):282次

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經(jīng)營(yíng)模式:生產(chǎn)廠家

商鋪產(chǎn)品:9991條

所在地區(qū):上海上海市

聯(lián)系人:游艷 (經(jīng)理)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

堿性磷酸酶抗體的概念:
Z初有人用電泳證明血清中抗體活性在γ球蛋白部分,故曾把抗體統(tǒng)稱(chēng)為丙種(γ)球蛋白。后來(lái)發(fā)現(xiàn),抗體并不都在γ區(qū);并且位于γ區(qū)的球蛋白,也不一定都具有抗體活性

詳細(xì)介紹

堿性磷酸酶抗體antibody,Ab)是機(jī)體免疫系統(tǒng)受到抗原刺激后產(chǎn)生的特異性球蛋白,稱(chēng)免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。根據(jù)其重鏈穩(wěn)定區(qū)的分子結(jié)構(gòu)和抗原性的不同,可將為類(lèi)Ig分為IgGIgAIgM、IgDIgE等五大類(lèi)。由遺傳基因決定所產(chǎn)生的抗體,稱(chēng)天然抗體(natural antibody),由抗原激發(fā)免疫細(xì)胞產(chǎn)生的抗體,稱(chēng)免疫抗體(immune antibody)或稱(chēng)特異地性抗體。人工制備的特異性抗體又可分為多克隆抗體、單克隆抗體和基因工程抗體三種類(lèi)型。

檢測(cè)病原體常用的堿性磷酸酶抗體有人工制備的特異性多克隆抗體、單克隆抗體和基因工程抗體三種類(lèi)型。

操作步驟:

1取適量Protein A+G Beads懸液,裝入層析柱,用10倍柱體積的PBS(或者TBS,下同)洗滌平衡層析柱。

2含抗體的血清或其它體液高速離心后,將上清與等體積2×PBS緩沖液混合,調(diào)整pH以及離子濃度后(確認(rèn)pH值為7±0.5),緩慢加入層析柱。

310倍柱體積以上的PBS洗滌,至流出液無(wú)蛋白檢出。

4加入2倍柱體積0.1 M 檸檬酸(Citrate Acid, pH 2.7)封閉流出管,靜置5分鐘后收集穿出液,重復(fù)三次。測(cè)定 OD280估算抗體濃度,如果所得抗體較多可以使用SDS-PAGE檢測(cè)純度。也可以選擇0.1 M*(Glycine, pH 3.0)洗脫。

5洗脫后的抗體立即加入2/5體積的1 M Tris,pH 9.0中和,使用Millipore蛋白濃縮管切換到所需緩沖液,或者透析,緩沖液通常為PBS含有0.02% NaN3以及1 mM EDTA。

6濃縮到所需體積,加入50%甘油;測(cè)定效價(jià)后,分裝并保存在-20℃,避免凍結(jié)。

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