中文名稱：MTS細胞增殖與細胞毒性檢測試劑盒

英文名稱：MTS Cell Proliferation And Cytotoxicity Detection Kit

產品規格：500次
產品貨號：BJ-01X6321

MTS是一種新型甲臜化合物，和MTT同屬四唑氮衍生物。MTS能被活細胞里的線粒體脫氫酶降解而產生棕黃色水溶性的甲臜，通過測定甲臜的光譜吸收，進而可以測定細胞的增殖情況。

細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備F-12K培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

TM3(小鼠睪丸間質細胞)    5×106cells/瓶×2    

TSCCa(人舌鱗癌細胞)    5×106cells/瓶×2    

U-2 OS(人骨肉瘤細胞)    5×106cells/瓶×2    

U251(人膠質瘤細胞)    5×106cells/瓶×2    

U-87 MG(人神經膠質瘤細胞)    5×106cells/瓶×2    

U-937(人組織細胞淋巴瘤細胞)    5×106cells/瓶×2    

V79(倉鼠肺細胞)    5×106cells/瓶×2    

VCaP(人前列腺癌細胞)    5×106cells/瓶×2    

Vero(非洲綠猴腎細胞)    5×106cells/瓶×2    

WI-38(人胚肺細胞)    5×106cells/瓶×2    

WISH(人羊膜細胞)    5×106cells/瓶×2    

Y1(Y-1) (小鼠腎上腺皮質細胞)    5×106cells/瓶×2    

YAC-1(小鼠淋巴瘤細胞)    5×106cells/瓶×2    

ZR-75-1(人乳腺癌細胞)    5×106cells/瓶×2    

ZR-75-30(人乳腺癌細胞)    5×106cells/瓶×2    

16HBE(人支氣管上皮樣細胞)    5×106cells/瓶×2    

801-D (人巨細胞性肺癌細胞)    5×106cells/瓶×2    

A2(人腺樣囊性癌細胞)    5×106cells/瓶×2    

A-427(人肺癌細胞)    5×106cells/瓶×2    

A-498(人腎癌細胞)    5×106cells/瓶×2    

A875(人黑色素瘤細胞)    5×106cells/瓶×2    

肺α/β水解酶蛋白3抗體    

三磷酸腺苷結合盒轉運蛋白F亞基3抗體    

三磷酸腺苷結合盒轉運蛋白A亞基5抗體    

ADCK1蛋白抗體    

酰基結合結構域蛋白4抗體    

α/β水解酶4抗體    

ADCK2蛋白抗體    

乙醛脫氫酶16家庭A1抗體    

粘附分子IgG樣結構域蛋白3抗體    

乙醇脫氫酶1抗體    

δ氨基乙酰丙酸脫水酶抗體    

肌側索硬化癥相關蛋白4抗體    

α2巨球蛋白抗體    

ACCSL蛋白抗體    

甲胎蛋白抗體    

β淀粉樣前體蛋白結合蛋白3抗體    

星形肌動蛋白抗體    

系統性紅斑狼瘡相關蛋白TREX1抗體    

磷酸化系統性紅斑狼瘡先關蛋白TREX1抗體    

磷酸化系統性紅斑狼瘡相關蛋白TREX1抗體    

MTS細胞增殖與細胞毒性檢測試劑盒頭相關蛋白復合體AP-2μ鏈1抗體    

磷酸化接頭相關蛋白復合體AP-2μ鏈1抗體    

膜粘連蛋白7抗體    

操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
 a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)