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貨號 | BJ-01S9513 |
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產品屬性:
產品名稱:NAD激酶測試盒50管/24樣
檢測方法:可見分光光度法
產品分類:輔酶Ⅰ系列
產品規格: 50管/24樣
檢測方法:可見分光光度法
產品貨號:BJ-01S9513
商品介紹:
測定意義: NADK(EC 2.7.1.23)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是目前所發現的生物體內惟一能夠催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶,可催化NAD(H)以ATP或無機多聚磷酸[poly(P)]作為磷酰基供體進行磷酸化反應,生成NADP(H)。因此,NAD激酶在合成NADP(H)以及調節NAD(H)與NADP(H)的平衡上具有重要作用。 測定原理: NADK催化NAD+磷酸化,生成NADP+;NADP+可被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH;NADPH通過PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT),通過在600 nm下測定MTT的還原速度(吸光值的變化)可反映出NADK活性的大小。 需自備的儀器和用品: 可見分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL玻璃比色皿和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10) |
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。
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注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。
若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通常可以使測定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
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